Synthèse enzymatique de la DHA-lysophosphatidylcholine et évaluation de son effet sur la lignée cellulaire de cancer du sein humain MDA-MB 231
Auteur / Autrice : | Dalal Mohamad Ali |
Direction : | Lionel Ulmann, Gaëlle Pencreac'h, Laurent Poisson |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biochimie, biologie moléculaire et cellulaire |
Date : | Soutenance le 22/02/2022 |
Etablissement(s) : | Le Mans |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Sciences de la mer et du littoral (Plouzané) |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Laboratoire Biologie des Organismes, Stress, Santé, Environnement (Le Mans) - Biologie des Organismes- Stress- Santé- Environnement [Le Mans Université] / BiOSSE |
Jury : | Examinateurs / Examinatrices : Lionel Ulmann, Gaëlle Pencreac'h, Laurent Poisson, Yolande Perrin, Laurent Picot, Benoît Schoefs |
Rapporteurs / Rapporteuses : Catherine Humeau-Virot, Vincent Rioux |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Ce travail étudie la synthèse de DHA-lysophosphatidylcholine (LPC-DHA) par estérification enzymatique, catalysée par une lipase et sans solvant, ainsi que la capacité de la LPC-DHA à réduire la viabilité cellulaire de la lignée cancéreuse humaine MDA-MB-231. Une optimisation des paramètres de l’estérification entre la glycerophosphatidylcholine (GPC) et l’acide docosahexaénoïque (DHA, C22 :6 -3) a été réalisée selon la méthodologie des surfaces de réponse (RSM). Deux réponses ont été mesurées : le rendement de conversion de la GPC et la concentration en LPC-DHA dans le milieu. Un rendement de conversion de la GPC de 67% est obtenu dans les conditions réactionnelles suivantes : rapport molaire DHA/GPC de 17, température de réaction de 36°C et quantité de la lipase B de Candida antarctica immobilisée Novozym® 435 de 15%. La concentration maximale de LPC-DHA obtenue est de 245 mM dans les conditions suivantes : rapport molaire DHA/GPC de 4, température de 36°C et quantité de Novozym® 435 de 15%. Une caractérisation par RMN a permis de confirmer que le composé synthétisé correspond à l’isomère sn-1 de la LPC-DHA, qu’il est pur et non oxydé. L’étude in vitro de l’effet de différentes LPC et différents vecteurs lipidiques du DHA sur les cellules MDA-MB-231 a montré que la LPC-DHA est la plusefficace pour réduire la viabilité cellulaire, les IC50 de la LPC-DHA, PC-DHA, du MAG-DHA, et du DHA libre étant de 19 µM, 50 µM, 300 µM et 347 µM, respectivement. La LPC-DHA et la PC-DHA réduisent la viabilité cellulaire principalement en induisant un stress oxydatif et une altération de la membrane plasmique. Le DHA et le MAG-DHA induisent également un stress oxydatif. En conclusion, ce travail a abouti à la synthèse de LPC-DHA dans des conditions de réaction favorables et a montré un effet inhibiteur significatif de la viabilité de cellules de cancer du sein, in vitro.