HPTLC-bioautographie : développements, criblage d’espèces végétales de la famille des Pittosporaceae et tests innovants

HPTLC-bioautography : developments, screening of plant species of the Pittosporaceae family and innovative tests

• Auteur / Autrice : Valentin Hilaire
• Direction : Xavier Fernandez, Anne Landreau
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie
• Date : Soutenance le 10/12/2021
• Etablissement(s) : Université Côte d'Azur
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Sciences fondamentales et appliquées (Nice ; 2000-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Institut de chimie (Nice)
• Jury : Président / Présidente : Véronique Michelet
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Xavier Fernandez, Anne Landreau, Véronique Michelet, Gaëtane Wielgosz-Collin, Pierre Chalard, Grégory Michel
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Gaëtane Wielgosz-Collin, Pierre Chalard

Mots clés

Mots clés contrôlés

Chromatographie

Mots clés libres

HPTLC

Extraits végétaux

Tests biologiques

HPTLC-bioautographie

HPTLC

Vegetal extracts

Biological tests

HPTLC-bioautography

Résumé

Cette thèse porte sur l’étude d’une méthode de criblage de bio activités de composés naturels en plein essor : l’HPTLC-bioautographie. C’est une technique couplant une séparation chromatographique et des tests d’activité biologique. La séparation des composés naturels de l’extrait à tester va s’effectuer sur une plaque d’HPTLC et cette même plaque développée va être révélée par différentes méthodes permettant de tester les activités biologiques des composés. Généralement, il existe plusieurs catégories de tests utilisables : les tests antimicrobiens, les tests enzymatiques et les tests chimiques (notamment la recherche d’antioxydants). Ce travail résulte d’un partenariat (CIFRE) entre Université Côte d’Azur et la société BotaniCert, spécialisée dans l’analyse phytochimique. La demande de la société BotaniCert souhaitant se pourvoir en méthodes de criblage d’activités a conduit à la recherche des tests d’HPTLC-bioautographie existants et développables dans un laboratoire de chimie (certains tests antimicrobiens nécessitent la manipulation d’organismes pathogènes et ne sont effectuables que dans des laboratoires adaptés). Le choix de certaines pathologies découlant d’une demande en recherche et développement a mené à l’adaptation au laboratoire de BotaniCert des plusieurs tests de criblage enzymatiques (α-glucosidase, acétylcholinestérase, lipase pancréatique) ainsi que de deux tests antimicrobiens (Bacillus subtilis et Aliivibrio fischeri). L’adaptation de ces tests s’est accompagnée du criblage de plusieurs espèces du genre Pittosporum. Le troisième volet de ce travail de thèse a porté sur le développement d’un nouveau test en HPTLC-bioautographie. Celui-ci est le fruit d’un partenariat avec l’équipe 6 du C3M de l’Hôpital l’Archet de Nice et porte sur le criblage de composés anti-leishmaniens. En effet les protozoaires n’ont jamais fait l’objet de développements de tests de criblage par HPTLC-bioautographie. Deux tests ont vu le jour, chacun sur une des deux formes du parasite Leishmania infantum : la forme promastigote extracellulaire et la forme amastigote intracellulaire. Ces deux formes ayant des conditions de survie très différentes, les deux tests ont été développés selon deux techniques différentes : la bioautographie directe pour la forme promastigote et la bioautographie par agar overlay pour la forme amastigote.

This thesis focuses on the study of a screening method for the bioactivities of natural compounds booming: HPTLC-bioautography. It is a technique combining a chromatographic separation and biological activity tests. The separation of natural compounds from the extract to be tested will be carried out on an HPTLC plate and this same developed plate will be revealed by different methods to test the biological activities of compounds. Generally, there are several categories of tests that can be used: tests antimicrobials, enzyme tests and chemical tests (including research of antioxidants). This work is the result of a partnership (CIFRE) between Université Côte d´Azur and the BotaniCert company, specialized in phytochemical analysis. The request of the BotaniCert company wishing to acquire screening methods activities led to the search for existing HPTLC-bioautography tests and developable in a chemistry laboratory (some antimicrobial tests require the handling of pathogenic organisms and can only be done in laboratories adapted). The choice of certain pathologies resulting from a demand for research and development led to the adaptation to the BotaniCert laboratory of several tests of enzymatic screening (α-glucosidase, acetylcholinesterase, pancreatic lipase) as well as two antimicrobial tests (Bacillus subtilis and Aliivibrio fischeri). The adaptation of these tests is accompanied by the screening of several species of the genus Pittosporum.The third part of this thesis work focused on the development of a new test in HPTLC-bioautography. This is the result of a partnership with team 6 of the C3M in Nice hospital L’ Archet and focuses on the screening of anti-Leishman compounds. This protozoa have never been the subject of developments in screening tests by HPTLC-bioautography. Two tests have emerged, each on one of the two stages of the parasite Leishmania infantum: the extracellular promastigote stage and the intracellular amastigote stage. These two stages having very different survival conditions, the two tests were developed using two different techniques: direct bioautography for promastigote stage and overlay agar bioautography for the amastigote stage.