Etude quantitative de la sécrétion de lipase, de la lipolyse et du stockage de lipides chez Yarrowia lipolytica lors de sa croissance en présence d'huile d'olive

Quantitative study of lipase secretion, extracellular lipolysis and lipid storage in the yeast Yarrowia lipolytica grown in the presence of olive oil

• Auteur / Autrice : Amal Najjar
• Direction : Frédéric Carrière
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie, biologie végétale et biotechnologies
• Date : Soutenance le 29/10/2010
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2
• Ecole(s) doctorale(s) : École Doctorale Sciences de la Vie et de la Santé (Marseille)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : EIPL - Laboratoire d'Enzymologie Interfaciale et de Physiologie de la Lipolyse (Marseille)
• Jury : Président / Présidente : Jean-Louis Romette
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Frédéric Carrière, Jean-Louis Romette, Elisée Ferré, Pierre Villeneuve
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Elisée Ferré, Pierre Villeneuve

Mots clés

Mots clés contrôlés

Microorganismes -- Croissance

Inhibiteurs

Levure (agent de fermentation)

Lipolyse

Yarrowia lipolytica

Lipases

Lipides -- Métabolisme

Acides gras

Mots clés libres

Acide Gras

Métabolisme des Lipides

Lipolyse

Lipase

Yarrowia lipolytica

Levures

Croissance Microbienne

Triglycéride

Cristallogenèse

Inhibiteurs

Fatty acid

Lipid metabolism

Lipolysis

Lipase

Yarrowia lipolytica

Microbial growth

Triglyceride

Yeast

Crystallogenesis

Inhibitors

Résumé

La sécrétion de lipase, la lipolyse extracellulaire et l’absorption des acides gras (AGL) ont été étudiés chez Yarrowia lipolytica (YL) en présence d’huile d’olive et/ou de sucrose. Des mesures d’activité lipase et d’immuno-révélation ont montré que l’activité lipase présente dans le milieu de culture provenait principalement de la lipase YLLIP2. L’huile d’olive induit la production de lipase qui est principalement associée aux cellules pendant les premières heures de cultures. YLLIP2 est ensuite libérée dans le milieu de culture avant d’être totalement dégradée par les protéases. Les triglycérides (TG) sont dégradés alors que la lipase est encore attachée aux cellules. Les produits de lipolyse présents dans le milieu de culture et à l’intérieur des cellules ont été quantifiés par chromatographie TLC-FID et GC. Les niveaux intracellulaires d’AGL et de TG augmentent transitoirement et dépendent de la source de carbone utilisée. Une accumulation maximum de 37,8 % w/w de lipides est observée avec l’huile d’olive seule. Cette étude montre que la levure YL est un modèle intéressant pour étudier la lipolyse extracellulaire et l’absorption des acides gras par les cellules

Lipase secretion, extracellular lipolysis and fatty acid (FFA) uptake were quantified in Yarrowia lipolytica (YL) grown in the presence of olive oil and/or sucrose. Lipase assays and western blot analysis indicated that the lipase activity measured in YL cultures mainly resulted from YLLIP2 lipase. Lipase production was triggered by olive oil and YLLIP2 remained associated with the yeast cells during the first hours of culture. It was then released in the culture medium before it was totally degraded by the alkaline protease. Olive oil triglycerides (TG) were degraded when the lipase was still attached to the cell wall. The fate of lipolysis products in the culture medium and inside the yeast cell were investigated by quantitative TLC-FID and GC analysis. Intracellular levels of FFA and TG increased transiently and were dependent on the carbon sources. A maximum fat storage of 37.8% w/w was observed with olive oil alone. The present study shows that yeasts are interesting models for studying extracellular lipolysis and fat uptake by the cell