Recherche Avancée

Thèse soutenue

Production et sécrétion de l'alpha-galactosidase par Saccharomyces cerevisiae recombinant

FR  |  
EN
Auteur / Autrice : Florence Boisnard
Direction : Gérard Goma
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Microbiologie. Biotechnologie
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Toulouse, INSA

Résumé

FR

La production et la secretion de l'alpha-galactosidase par saccharomyces cerevisiae recombinant ont ete etudiees. Pour ce faire, une souche a ete construite, un milieu de culture synthetique non limitant pour la croissance a ete propose et un protocole de mesure de l'activite enzymatique a ete etabli. L'analyse comparative de la croissance de la souche hote et de la souche recombinante en culture discontinue en metabolisme oxydo-reductif a montre que pour les deux souches les parametres cinetiques de croissance sont sensiblement identiques confirmant que la presence du plasmide ne modifie pas significativement la croissance du microorganisme. L'expression du gene heterologue est constitutive ; la production et la secretion de l'enzyme ont lieu uniquement en phase de croissance. L'enzyme produite est retrouvee pour trois quarts au niveau du periplasme et pour un quart dans le milieu de culture. L'utilisation de milieux de culture varies a clairement indique le role joue par la composition du milieu sur les niveaux de production et de secretion de l'alpha-galactosidase. La production et la repartition de l'enzyme sont affectees par la nature des composes et non par l'augmentation de l'osmolarite resultant de l'ajout de ces composes. L'augmentation du pourcentage de secretion a pu etre correlee avec l'elevation de la force ionique du milieu. La relation vitesse specifique de production d'alpha-galactosidase vitesse specifique de croissance a ete etablie pour des cultures differant par le type de fonctionnement metabolique et/ou le mode de mise en uvre. Il a ete montre que la vitesse specifique de production augmente avec la vitesse specifique de croissance, et, qu'a taux de croissance donne elle diminue lorsque la concentration en glucose residuel augmente. Ainsi, des parametres operatoires permettant de maximiser la production ont ete proposes: taux de croissance eleve, concentration en glucose residuel nulle et une quantite de biomasse importante