Mode d'action des alpha-amylases d'orge et de pancréas de porc sur les substrats nitrophényles. Détermination des énergies de fixation des résidus de glucose aux sous-sites du centre actif

Mode of action of barley ans porcine pancreas alpha-amylase using nitrophenylated maltodesxtrins. Affinity of glucose residue at the subsites of the active center

• Auteur / Autrice : El Hassan Ajandouz
• Direction : Guy Marchis-Mouren
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie. Nutrition, aspects moléculaires et cellulaires
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Orge

Pancréas

Enzymes digestives

Résumé

L'alpha-amylase est une endoglycanase de la classe des hydrolases. Largement representee chez les animaux, chez les vegetaux et chez les micro-organismes, elle catalyse l'hydrolyse de l'amidon et du glycogene. Bien que les alpha-amylases de differentes origines ont tres peu de sequences d'acides amines identiques, leur structure tridimensionnelle et l'organisation de leur site actif sont similaires. Leur chaine polypeptidique est organisee en trois domaines, dont l'un (domaine a) forme un tonneau de huit segments beta entoures par huit helices alpha. Leurs sites actifs sont constitues d'un ensemble de sous-sites pouvant accueillir chacun un residu glucose et dont le nombre varie selon l'origine de l'enzyme. Trois formes enzymatiques de l'amylase d'orge d'une part et deux formes enzymatiques de l'amylase pancreatique de porc d'autre part ont ete etudiees. Les produits d'hydrolyse d'oligosaccharides nitrophenyles de differentes longueurs (2 a 7 residus glucose) ont ete analyses par chromatographie (hplc). Les frequences des produits et les efficacites catalytiques des differentes formes enzymatiques, determinees dans des conditions ou les reactions bimoleculaires sont negligeables, ont finalement ete determinees, elles nous ont permis de calculer les energies d'interaction de diverses paires de substrats et par difference, de calculer l'energie d'interaction des divers sous-sites. Dix sous-sites sont detectes chez les trois formes enzymatiques de l'amylase d'orge dont l'un (sous-site catalytique) a une energie defavorable a la fixation. Les deux formes de l'amylase pancreatique de porc contiennent cinq sous-sites a energies favorables entoures de part et d'autre par deux sous-sites a energie defavorable