Production de particules vaccinales bivalentes VHB-VHC à l'aide de la lignée hépatocytaires PLC/PRF/5 génétiquement modifiée par la technologie CRISPR/Cas9

Production of bivalent HBV-HCV vaccine particles using the PLC/PRF/5 hepatoma cell line genetically modified by CRISPR/Cas9 technology

• Auteur / Autrice : Rana Mansour
• Direction : Philippe Roingeard
• Type : Projet de thèse
• Discipline(s) : Sciences de la Vie et de la Santé
• Date : Inscription en doctorat le 01/10/2024
• Etablissement(s) : Tours
• Ecole(s) doctorale(s) : Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant - SSBCV
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Morphogénèse et Antigénicité du VIH, des Virus des Hépatites et émergents

Mots clés

Mots clés libres

Particules vaccinales bivalentes VHB-VHC

Technologie CRISPR-Cas9

Lignée hépatocytaire PLC/PRF/5

Vaccination prophylactique

Bivalent HBV-HCV vaccine particles

PLC/PRF/5 hepatoma cell line

CRISPR-Cas9 technology

Prophylactic vaccination

Résumé

Dans l'effort de développer une stratégie vaccinale originale contre le virus de l'hépatite C (VHC), notre unité de recherche a généré ces dernières années de nouvelles particules vaccinales similaires à celles utilisées pour le vaccin contre le virus de l'hépatite B (VHB), mais qui présentent en outre les glycoprotéines d'enveloppe E1 et E2 d'un VHC de génotype 1a à leur surface. Produites en cellules ovariennes de hamster (lignée CHO), ces particules chimères VHB-VHC induisent la production d'anticorps dirigés contre les protéines d'enveloppe du VHB et du VHC chez les animaux vaccinés. De façon intéressante, certains des anticorps produits neutralisent efficacement in vitro les infections par des souches hétérologues de VHC de différents génotypes, avec une efficacité toutefois génotype-dépendante. Notre objectif est à présent d'optimiser le mode de présentation des glycoprotéines d'enveloppe du VHC exposées en surface des particules vaccinales, de manière à accroître leur immunogénicité et les propriétés de neutralisation inter-génotypiques des anticorps induits par la vaccination. Dans le cadre de ce projet de thèse, nous proposons de révolutionner notre système de production en utilisant la lignée hépatocytaire PLC/PRF/5, qui est aujourd'hui largement connue pour ses capacités à exprimer et sécréter très efficacement la protéine S du VHB, et qui sera modifiée génétiquement par la technologie CRISPR/Cas9 pour exprimer également nos immunogènes d'intérêt (E1-S et E2-S). De par ce nouveau mode de production, nous espérons permettre une présentation des immunogènes qui soit plus proche de celle observée au cours d'une infection naturelle et l'induction de réponses immunitaires humorales qui soient plus spécifiques des LVPs natives du VHC. À terme, ce projet nous permettra d'optimiser notre candidat vaccin bivalent VHB/VHC, dont l'objectif global est de protéger efficacement et simultanément contre ces deux agents pathogènes hépatotropes majeurs, et renforcer ainsi la prévention contre les hépatopathies de forme grave, et notamment le cancer du foie viro-induit.

In the efforts to develop an original vaccine strategy against the hepatitis C virus (HCV), our research unit has generated in recent years new vaccine particles similar to those used for the vaccine developed against the hepatitis B virus (HBV). These original vaccine particles however additionally present the envelope glycoproteins E1 and E2 of a genotype 1a HCV on their surface. Produced in hamster ovary cells (CHO cell line), these chimeric HBV-HCV particles induce the production of antibodies against both the HBV and HCV envelope proteins in vaccinated animals. Interestingly, some of these antibodies efficiently neutralize in vitro infections by heterologous HCV strains of different genotypes, but in a genotype-dependent manner. Our objective is now to improve the presentation of the HCV envelope glycoproteins on the surface of the vaccine particles in order to increase their immunogenicity and the inter-genotypic neutralizing properties of the antibodies induced by vaccination. In this thesis project, we propose to revolutionize our production system by using the PLC/PRF/5 hepatoma cell line, which is widely known for its ability to express and secrete the HBV S protein very efficiently, and which will be genetically modified by CRISPR/Cas9 technology to also express our immunogens of interest (E1-S and E2-S). Through this new production process, we hope to enable a presentation of the immunogens closer to that observed during a natural infection. This native-like presentation should thus induce humoral immune responses more specific to native HCV LVPs. Ultimately, this project will allow the optimization of our bivalent HBV/HCV vaccine candidate, which could efficiently and simultaneously protect against these two major hepatotropic agents, and thus strengthen the prevention against severe liver diseases, including virus-induced liver cancers.