Etude du rôle de Myd88 dans la transformation du lymphocyte B post-centre germinatif et conséquences sur le micro-environnement immun

Role of Myd88 in the post-germinal center B-cell transformation and consequences for the immune microenvironment

• Auteur / Autrice : Maxime Tabaud
• Direction : Nathalie Faumont, Christelle Fabert
• Type : Projet de thèse
• Discipline(s) : Biologie Chimie Santé mention Immunologie, oncologie, inflammation, infectiologie
• Date : Inscription en doctorat le 15/09/2024
• Etablissement(s) : Limoges
• Ecole(s) doctorale(s) : Biologie, Chimie, Santé
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Contrôle de la Réponse Immune B et lymphoproliférations
• Partenaire(s) de recherche : Equipe de recherche : CRIBL 2MB2C - Mécanismes Moléculaires de Cancérogénèse des Lymphocytes B

Mots clés

Mots clés libres

Lymphome B

Oncogenèse

NF-kappa B

Oncogenesis

NF-kappa B

B-cell lymphoma

Résumé

Les lymphomes B sont des cancers du lymphocyte B (LB) classés en deux catégories principales : le lymphome de Hodgkin ou les lymphomes non Hodgkiniens B (LNH B). NF-Kappa B (NF-KB) est le système transcriptionnel le plus souvent cité dans la littérature sur les LNH B qu'ils soient indolents (évolution lente) ou agressifs (évolution rapide). L'activation constitutive de NF-KB, notamment via le BCR et/ou le microenvironnement, est le 2ème facteur de danger majeur de la transformation du LB (Pasqualucci and Klein, 2022). La Maladie de Waldenström (MW) est un lymphome lymphoplasmocytaire (LPL) incurable et indolent des personnes âgées qui représente moins de 5% des lymphomes à cellules B. Ce lymphome à évolution lente est caractérisé par l'expansion d'un clone lymphoplasmocytaire de localisation médullaire avec sécrétion d'une immunoglobuline monoclonale de type M (IgM). Une des particularités de la MW est que les cellules clonales présentent une différenciation continue entre le petit lymphocyte mature et le plasmocyte mature (PC) (Gayet et al., 2021). La découverte de la mutation L265P au niveau du gène MYD88 dans plus de 90% des patients (une protéine adaptatrice impliquée dans la signalisation du Toll Like Receptor et activant la voie NF-KB) a démontré que la MW est une véritable entité génétiquement distincte des autres lymphomes indolents avec sécrétion d'IgM (Buske and Leblond, 2013; Gachard et al., 2013; Treon et al., 2012). Malgré l'arrivée de nouvelles thérapies, la MW reste toujours incurable. Il est donc important de développer de nouvelles approches dans ce domaine. Au laboratoire CRIBL, nous avons créé un modèle animal porteur de la mutation murine de Myd88L252P (orthologue de la mutation humaine MYD88 L265P) au niveau du locus Rosa26 dont l'expression est inductible grâce au système Cre/Lox (Ouk et al., 2021). Une expression induite dans toutes les cellules B (Myd88L252P/Cd19_Cre) nous a permis de démontrer le pouvoir transformant de MYD88 dans la transformation B. Cependant, avec ce modèle nous ne reproduisons pas l'origine cellulaire du clone tumoral car l'expression de Myd88L252P est forcée dans toutes les cellules B dès les stades précoces. Or, dans le cadre de la MW, il est admis que l'équivalent non tumoral est le LB mémoire post-centre germinatif (Gachard et al., 2013; Parrens et al., 2008). Le premier objectif de cette thèse sera donc de mieux comprendre l'origine cellulaire du clone tumoral dans la MW en exprimant la mutation Myd88 uniquement dans les PC (Myd88L252P/ChainJ_Cre-ERT2). Un point fort de ce modèle est que l'induction se fera dans un petit pool de plasmocytes à un temps donné en présence de tamoxifène. De plus, Myd88 L252P coopérant préférentiellement avec BTK (une kinase de la voie du récepteur de la cellule B (BCR), nous étudierons également la coopération entre les voies NF-KB et du BCR en réalisant dans ce nouveau modèle inductible des immunisations aiguës et chroniques. La relation entre MYD88 L252P et PIM2 sera également étudiée i) in vitro avec la différenciation de LB humains MW et ii) in vivo dans nos modèles Myd88L252P/Cd19_Cre et ChainJ_Cre ; PIM2 étant une kinase importante pour la survie des PC et retrouvée surexprimée dans notre modèle Myd88L252P/Cd19_Cre. De plus, les mécanismes d'échappement à la réponse immune dans les LNH B mettent en exergue le rôle de NF-KB (Lemasson et al., 2021). Nous avons récemment mis en évidence, en présence de Myd88L252P, plusieurs mécanismes d'échappement à la réponse immune. Un autre objectif de la thèse sera de poursuivre ses travaux en testant ex vivo puis in vivo des combinaisons thérapeutiques ciblant à la fois les cellules B tumorales et le micro-environnement immun.

B-cell lymphomas are cancers of the B cells classified into two main categories: Hodgkin's lymphoma and non-Hodgkin's B-cell lymphomas (NHL-B). NF-Kappa B (NF-KB) is the transcriptional system most frequently cited in the literature for both indolent (slowly evolving) and aggressive (rapidly evolving) NHL-B. Constitutive activation of NF-KB, notably via the BCR and/or the microenvironment, is the 2nd major risk factor for B-cell transformation (Pasqualucci and Klein, 2022). Waldenström disease (WM) is an incurable, indolent lymphoplasmacytic lymphoma (LPL) of the elderly, representing less than 5% of B-cell lymphomas. This slowly progressive lymphoma is characterized by the expansion of a lymphoplasmacytic clone in the bone marrow, with secretion of monoclonal immunoglobulin type M (IgM). A particular feature of WM is that clonal cells show continuous differentiation between mature small lymphocyte and mature plasma cell (PC) (Gayet et al., 2021). The discovery of the L265P mutation in the MYD88 gene in over 90% of patients (an adaptor protein involved in Toll Like Receptor signaling and activating the NF-KB pathway) has demonstrated that WM is a distinct genetically entity from other indolent IgM-secreting lymphomas (Buske and Leblond, 2013; Gachard et al., 2013; Treon et al., 2012). Despite the development of new therapies, WM remains incurable. It is therefore important to develop new approaches in this field. In the CRIBL laboratory, we have created an animal model carrying the murine Myd88L252P mutation (ortholog of the human MYD88 L265P mutation) at the Rosa26 locus whose expression is inducible through the Cre/Lox system (Ouk et al., 2021). Induced expression in all B cells (Myd88L252P/Cd19_Cre) enabled us to demonstrate the transforming power of MYD88 in B-cell transformation. However, this model does not reproduce the cellular origin of the tumor clone, as Myd88L252P expression is forced in all B cells from the earliest stages. In WM, however, the non-tumoral equivalent is thought to be the memory LB post germinal center (Gachard et al., 2013; Parrens et al., 2008). The first objective of this thesis will therefore be to better understand the cellular origin of the tumor clone in WM by expressing the Myd88 mutation only in PCs (Myd88L252P/ChainJ_Cre-ERT2). A key feature of this model is that induction takes place in a small pool of plasma cells at a given time in the presence of tamoxifen. Moreover, as Myd88 L252P cooperates preferentially with BTK (a kinase of the B cell receptor (BCR) pathway), we will also study the cooperation between the NF-KB and BCR pathways by performing acute and chronic immunizations in this new inducible model. The relationship between MYD88 L252P and PIM2 will also be studied i) in vitro with the differentiation of human MW LBs and ii) in vivo in our Myd88L252P/Cd19_Cre and ChainJ_Cre models; PIM2 being an important kinase for PC survival and found overexpressed in our Myd88L252P/Cd19_Cre model. Furthermore, mechanisms of immune escape in NHL-B highlight the role of NF-KB (Lemasson et al., 2021). We have recently demonstrated several mechanisms of immune escape in the presence of Myd88L252P. Another aim of the thesis will be to pursue this work by testing ex vivo and then in vivo therapeutic combinations targeting both tumor B cells and the immune microenvironment.