Impact de l'hypoxie physiologique sur la morphogenèse et le pouvoir infectieux du virus de l'hépatite B (VHB)

Impact of physiological hypoxia on both morphogenesis and infectivity of the hepatitis B virus (HBV

• Auteur / Autrice : Mona Nivard
• Direction : Hugues De rocquigny, Philippe Chouteau
• Type : Projet de thèse
• Discipline(s) : Sciences de la Vie et de la Santé
• Date : Inscription en doctorat le 01/10/2023
• Etablissement(s) : Tours
• Ecole(s) doctorale(s) : Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant - SSBCV
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Morphogénèse et Antigénicité du VIH, des Virus des Hépatites et émergents

Mots clés

Mots clés libres

Vhb

Hypoxie

Morphogenèse

Infectiosité

Microscopie

Hbv

Hypoxia

Morphogenesis

Infectivity

Microscopy

Résumé

Lors de la morphogenèse du VHB, les protéines d'enveloppe recrutent les nucléocapsides (NC) contenant le génome viral pour former les virions infectieux (appelés virions ADN). Plusieurs raisons expliquent que le suivi de cette morphogenèse en cellules permissives reste très flou. D'une part, la quantité de ces virons-ADN est 3 à 4 log inférieure à celle des particules sous virales (PSV) constituées uniquement des protéines d'enveloppe. D'autre part, très peu d'outils, d'imagerie notamment, ont été développés pour identifier les différents partenaires viraux impliqués dans cet assemblage. Enfin, les quelques résultats actuels proviennent de modèles d'étude in vitro très éloignés de la physiologie in situ de l'hépatocyte. Les cellules sont cultivées dans des conditions d'oxygénation qui ne miment en rien l'environnement hépatique qui est soumis à une très faible pression en oxygène (hypoxie physiologique). Ces différences peuvent sévèrement impacter le cycle intracellulaire d'un virus hépatotrope. L'objectif de cette thèse est donc de décrire avec précision la morphogenèse du VHB en cellules hépatocytaires cultivées dans des conditions proches de celles rencontrées in vivo. Au laboratoire, nous maitrisons la culture d'hépatocytes en condition d'hypoxie physiologique. Nous possédons en outre des anticorps anti-viraux spécifiques, des protéines chimériques fluorescentes et des sondes FISH. Ces outils, associées à l'expertise que nous avons de plusieurs méthodes d'imagerie à très haute résolution, permettront d'identifier en modèle cellulaire adapté chacun des constituants viraux afin de distinguer les virus infectieux des PSV et de préciser leur localisation intracellulaire. Ce travail de thèse permettra ainsi de mieux comprendre le cycle viral complet du VHB et sera utilisé dans le cadre du développement de nouvelles générations de molécules antivirales ciblant spécifiquement son assemblage.

During HBV morphogenesis, envelope proteins recruit nucleocapsids (NC) containing the viral genome to form infectious virions. There are several reasons why the monitoring of this morphogenesis in permissive cells remains very unclear. On the one hand, the amount of these infectious virions is 3 to 4 log lower than the amount of sub-viral particles (SVPs) consisting of envelope proteins or empty capsids. On the other hand, very few tools have been developed to identify the different viral partners involved in this assembly. Finally, the present results were obtained under experimental cell culture conditions far from the physiological environment necessary for a hepatotropic virus. The objective of this thesis is therefore to describe the morphogenesis of HBV under more physiological conditions (physiological hypoxia) recently developed in the lab. We now have antibodies, fluorescent chimeric proteins, and FISH probes that, combined with several very high-resolution imaging methods, will allow us to identify each of the viral constituents in the cellular environment in order to distinguish infectious viruses from SVPs and their cellular localization. An application of this work will be to develop new generations of molecules with antiviral activity targeting HBV assembly.