Mise au point et validation de méthodes de préservation de la fertilité féminine

Development and validation of methods to preserve woman fertility

• Auteur / Autrice : Laure Chaput
• Direction : Florence Brugnon, Andrei Tchirkov
• Type : Projet de thèse
• Discipline(s) : Biologie santé
• Date : Inscription en doctorat le 01/11/2019
• Etablissement(s) : Université Clermont Auvergne (2021-...)
• Ecole(s) doctorale(s) : Sciences de la Vie, Santé, Agronomie, Environnement
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Imagerie Moléculaire et Stratégies Théranostiques

Mots clés

Mots clés libres

Préservation fertilité féminine

Détection maladie résiduelle par RT-qPCR

Sarcome d'Ewing

Tissu ovarien

Maturation in vitro rescue

Vitrification semi-automatique ovocytaire

Female fertility preservation

Minimal residual disease detection by RT-qPCR

Ewing sarcoma

Ovarian tissue

Rescue in vitro maturation

Oocyte semi-automated vitrification

Résumé

Dans le cadre de ce projet de thèse, nous allons déterminer le stade ovocytaire optimal (immature vs. mature) et la technique de vitrification la plus efficiente (manuelle vs. automatique) pour la vitrification des ovocytes maturés in vitro. Pour cela, nous allons étudier la qualité de la maturation nucléaire et cytoplasmique d'ovocytes maturés in vitro et vitrifiés. Trois groupes seront comparés (groupe 1 : MIV en frais, groupe 2 : Vitrification post-MIV (manuelle et semi-automatique GAVI®) et groupe 3 : Vitrification pré-MIV (manuelle et semi-automatique GAVI®)). Pour étudier la qualité de la maturation nucléaire des ovocytes, nous analyserons la cinétique de maturation in vitro (MIV) par time lapse (Geri®, Merck), la morphologie du fuseau méiotique ainsi que l'alignement des chromosomes par immunofluorescence (IF) et la ségrégation méiotique des chromosomes par CGH-Array. La qualité de la maturation cytoplasmique ovocytaire sera analysée par fluorescence en évaluant la relocalisation des granules corticaux en périphérie de l'ovocyte.

As part of this thesis project, we will determine the optimal oocyte stage (immature vs. mature) and the most efficient vitrification technique (manual vs. automatic) for the vitrification of matured oocytes in vitro. To do this, we will study the quality of nuclear and cytoplasmic maturation of oocytes matured in vitro and vitrified. Three groups will be compared (group 1: fresh MIV, group 2: post-MIV vitrification (manual and semi-automated GAVI®) and group 3: pre-MIV vitrification (manual and semi-automated GAVI®)). To study the quality of nuclear maturation of oocytes, we will analyze the kinetics of in vitro maturation (MIV) by time lapse (Geri®, Merck), the morphology of the meiotic spindle as well as the alignment of chromosomes by immunofluorescence (IF) and meiotic segregation of chromosomes by CGH-Array. The quality of oocyte cytoplasmic maturation will be analyzed by fluorescence by evaluating the relocalization of cortical granules to the periphery of the oocyte.