Caractérisation du microenvironnement immunitaire des métastases hépatiques de l'adénocarcinome canalaire pancréatique et identification de nouvelles cibles thérapeutiques

Characterization of the immune microenvironment of pancreatic ductal adenocarcinoma liver metastases and identification of new therapeutic targets

• Auteur / Autrice : Jeanne Magnan
• Direction : Ilaria Cascone, José Cohen
• Type : Projet de thèse
• Discipline(s) : Pathologie et recherche clinique
• Date : Inscription en doctorat le 01/10/2022
• Etablissement(s) : Paris 12
• Ecole(s) doctorale(s) : Ecole doctorale Sciences de la Vie et de la Santé
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Institut Mondor de Recherche Biomédicale (Créteil)
• Partenaire(s) de recherche : Equipe de recherche : Equipe COHEN - Immunorégulation et Biothérapie (I-BIOT)

Mots clés

Mots clés libres

Cancer du Pancréas

Infiltrat immunitaire

Microenvironnement tumoral

Métastases hépatiques

Cdkn2a

Pancreatic Cancer

Immune infiltrate

Tumor Microenvironment

Liver metastasis

Cdkn2a

Résumé

Introduction : CDKN2A est un locus génique suppressed de tumeur codant par épiage alternatif pour les protéines p16INK4a et p14ARF. Dans 40 à 50 % des cas d'adénocarcinome canalaire du pancréas (PDAC), il y a inactivation des deux allèles de CDKN2A. Des taux de mutation élevés de CDKN2A sont associés à un microenvironnement d'échappement immunitaire caractérisé par des cellules T régulatrices. Nous avons cherché à étudier l'impact de l'expression de CDKN2A dans le microenvironnement immunitaire du PDAC. Méthodes : Au laboratoire, nous disposons de lignées cellulaires de PDAC portant les mutations KRAS G12D et TP53 R172H (KPCwtCDKN2A) ainsi qu'une délétion hétérozygote des exons 2 et 3 du gène CDKN2A (mPDACdelCDKN2A). Les protéines p16 et p19 seront introduites dans les cellules mPDACdelCDKN2A pour générer des clones cellulaires mPDACdelCDKN2A+p16+p19. La capacité proliférative de ces cellules, leur progression dans le cycle cellulaire et l'expression des co-récepteurs des cellules T ont été étudiées à l'aide des techniques d'incucyte et de cytométrie en flux. Les cellules ont été injectées orthotopiquement chez des souris syngéniques, et la croissance tumorale a été mesurée. Le phénotype des cellules tumorales et des cellules immunitaires isolées des tumeurs orthotopiques a été analysé par cytométrie en flux. Dans certains essais, les souris ont été traitées par le palbociclib, qui restaure pharmacologiquement la fonction de CDKN2A. Résultats : La délétion de CDKN2A semble être associée à un microenvironnement plus immunosuppresseur avec une proportion plus élevée de cellules T régulatrices et de cellules T effectrices épuisées. Les tumeurs mPDACdelCDKN2A dans lesquelles l'expression de CDKN2A a été restaurée par le palbociclib ou par l'expression de p16 et p19 ont montré une réduction de la croissance tumorale et un profil réduit d'épuisement des cellules T. Conclusion : Ensemble, les protéines p16 et p19 exprimées par les cellules tumorales semblent influencer la croissance tumorale et l'évolution du microenvironnement immunitaire tumoral.

Introduction: CDKN2A, a gene locus encoding the human tumor suppressor proteins p16INK4a and p14ARF by alternative splicing. 40-50% of pancreatic cancer ductal adenocarcinoma (PDAC) cases exhibit inactivation of both CDKN2A alleles. High mutation rates of CDKN2A are associated with an immune-escape microenvironment characterized by regulatory T cells. We sought to investigate the impact of CDKN2A expression in PDAC immune microenvironment. Methods: In laboratory we have PDAC cell lines harboring KRAS G12D and TP53 R172H (KPCwtCDKN2A) and along with a heterozygous deletion of the exon 2 and 3 of CDKN2A gene (mPDACdelCDKN2A). p16 and p19 will be introduced in mPDACdelCDKN2A to generate mPDACdelCDKN2A+p16+p19 cell clones. The proliferative capacity of these cells, their cell cycle progression and expression of co-receptors of T cells were studied by using Incucyte and flow cytometry. PDAC cells have been orthotopically injected in syngeneic mice and tumor growth was measured. The phenotype of tumor and immune cells isolated from the orthotopic tumors have been analyzed by flow cytometry. In some trial, mice have been treated by palbociclib that pharmacologically restored CDKN2A function. Results: CDKN2A deletion seemed to be associated with a more immune-suppressive with higher regulatory T cells and exhausted effector T cells. mPDACdelCKN2A tumors in which CDKN2A expression was restored by palbociclib or by p16 and p19 expression had a decreased tumor growth and a decrease profile of T cell exhaustion. Conclusion: Together, the p16 and p19 expressed by tumor cells, seems to impact tumor growth and the evolution of the immune tumor microenvironment.