Rôle central de l’apolipoprotéine E dans les différentes étapes du cycle de vie du virus de l’hépatite C

Pivotal role of apolipoprotein E on several steps of the hepatitis C virus lifecycle

• Auteur / Autrice : Julie Dreneau
• Direction : Jean-Christophe Meunier
• Type : Projet de thèse
• Discipline(s) : Sciences de la Vie et de la Santé
• Date : Inscription en doctorat le ; Soutenance le 13/02/2020
• Etablissement(s) : Tours
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Morphogénèse et Antigénicité du VIH et des Virus des Hépatites
• Jury : Président / Présidente : Antoine TOUZé
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Jean-Christophe Meunier, Laurence Cocquerel, Mirjam Zeisel, Hervé Lerat, Philippe Roingeard
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Mirjam Zeisel, Hervé Lerat

Mots clés

Mots clés libres

Interaction protéique

Apolipoprotein E

Résumé

Le virus de l’hépatite C (HCV) est retrouvé dans le sérum de patients ou dans le milieu de cellules infectées sous forme de lipo-viro particules (LVPs). Ces particules hybrides associent des composants viraux (ARN, protéine de capside core et les glycoprotéines d’enveloppe E1 et E2) avec des composants cellulaire (cholestérol, apolipoproteines (apo) dont apoE et apoB). Il a été montré qu’apoE jouait un rôle majeur dans l’infection et la production des particules virales mais les mécanismes par lesquels apoE y contribue reste encore mal compris. Au cours de ma thèse, nous avons pu approfondir les connaissances sur le rôle d’apoE dans le cycle viral du HCV. Nous avons mis en place une stratégie d’analyse du rôle d’apoE basée sur l’utilisation de clones Huh7.5 shRNA ApoE, présentant de façon croissante une inhibition de l’expression de cette protéine. Dans ces conditions et en examinant différentes étapes du cycle viral, nous avons pu mettre en évidence de nouvelles fonctions d’apoE nécessaires pour conférer une infectivité aux particules HCV. Tout d’abord, nous avons montré que cette protéine cellulaire était impliquée dans le repliement des glycoprotéines d’enveloppe E1E2, formant le complexe apoE-E1E2. De plus, nous avons observé que la diminution de l’expression d’apoE au sein des cellules conduit à une inhibition proportionnée de la production en particules virales infectieuses. Enfin, nous avons mis en évidence que la disponibilité d’ApoE dans les cellules va déterminer la taille des particules virales produites par les cellules et le nombre de molécules d’apoE présentes à la surface des LVP. L’ensemble de ces données révèle de nouvelles fonctions d’apoE, protéine cellulaire essentielle dans la morphogenèse du virus de l’hépatite C.

The hepatitis C virus (HCV) is found in the serum of patients or in the supernatant of infected cells as lipo-viro particles (LVPs). These hybrid particles combine viral components (RNA, core capsid protein and envelope glycoproteins E1 and E2) with cellular components (cholesterol, apolipoproteins (apo) including apoE and apoB). ApoE has been shown to play a major role in viral particles morphogenesis and infection, but the mechanisms explaining apoE influence on HCV lifecycle remain poorly understood. During my PhD, I aimed to provide new insights about the role of apoE in the viral cycle of HCV. We have set up a strategy allowing us to analyze apoE functions, using Huh7.5 ApoE shRNA clones showing an increasing inhibition of apoE expression. Using these clones for the examination of several stages of the viral cycle, we have been able to highlight new apoE functions that are necessary to confer infectivity to HCV particles. First, we have shown that this cellular protein is involved in the folding of E1E2 envelope glycoproteins, allowing the formation of the apoE-E1E2 complex. In addition, we have demonstrated that the decrease in apoE expression within cells leads to a proportionate inhibition of infectious particles production. Finally, we have shown that the availability of ApoE proteins within cells determines the size of released viral particles and the number of apoE molecules present on LVP membrane. All these data reveal new functions in HCV life cycle for the apoE protein, essential cellular factor in the morphogenesis of the hepatitis C virus.