Auto-assemblage en amyloïdes fonctionnels des hydrophobines de Aspergillus fumigatus
Auteur / Autrice : | Borja Rodriguez de Francisco |
Direction : | Iñaki Guijarro |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biochimie et biologie structurale |
Date : | Soutenance le 13/12/2019 |
Etablissement(s) : | Sorbonne université |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Complexité du vivant (Paris ; 2009-....) |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Institut Pasteur (Paris). Plate-Forme Technologique de RMN Biologique (2018-....) |
Jury : | Président / Présidente : Bertrand Friguet |
Examinateurs / Examinatrices : Olivier Lequin, Thierry Fontaine | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Christina Sizun, André Matagne |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Les hydrophobines sont des protéines fongiques qui s’assemblent aux interfaces hydrophobes/hydrophiles ou air-eau (IHH) pour former des fibres amyloïdes fonctionnelles qui s’organisent en couches dont le caractère amphiphile détermine leurs fonctions. Les spores du champignon pathogène opportuniste Aspergillus fumigatus sont couvertes d’une couche de bâtonnets constitués de fibres amyloïdes formés par l’hydrophobine RodA. Ce revêtement hydrophobe facilite la dispersion des spores et les rend inertes vis à vis du système immunitaire humain. Deux proches homologues de RodA, RodB et RodC, sont aussi présents dans la paroi cellulaire des spores. Nous avons réalisé une étude comparative de l’auto-assemblage de ces trois protéines avec un accent particulier sur RodC. Nous avons montré que RodA-C nécessitent d’une interface IHH pour s’assembler en fibres et mis en évidence l’importance de la nature de l’interface dans la morphologie de leurs assemblages. Nous avons observé une auto-inhibition de la fibrillation avec la concentration et montré que celle-ci est due à la saturation de l’interface air-eau. En étudiant l’effet de mutations ponctuelles sur les cinétiques de fibrillation de RodC, nous avons établi des similitudes et des différences par rapport aux régions importantes pour la formation de fibres pour RodC et RodA, étudiée au préalable. La transition du monomère à l’état amyloïde est accompagnée d’une perte de régions désordonnées et un gain de feuillets β intermoléculaires en accord avec les analyses par mutagénèse dirigée, qui indiquent que des résidus hydrophobes dans des régions flexibles du monomère sont impliqués dans le squelette β-croisé des fibres.