Thèse soutenue

Structural study of the complex formed by the Werner protein (WRN) and the Ku70/80 heterodimer
FR  |  
EN
Accès à la thèse
Auteur / Autrice : Sayma Zahid
Direction : Jean-Baptiste CharbonnierSophie CombetVirginie Ropars
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biochimie et biologie structurale
Date : Soutenance le 29/06/2022
Etablissement(s) : université Paris-Saclay
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Innovation thérapeutique : du fondamental à l'appliqué
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Institut de biologie intégrative de la cellule (Gif-Sur-Yvette, Essonne ; 2015-....)
référent : Faculté de pharmacie
graduate school : Université Paris-Saclay. Graduate School Santé et médicament (2020-....)
Jury : Président / Présidente : Herman Van Tilbeurgh
Examinateurs / Examinatrices : Célia Plisson-Chastang, Joanna Timmins, Léonard Chavas, Valérie Biou
Rapporteurs / Rapporteuses : Célia Plisson-Chastang, Joanna Timmins

Résumé

FR  |  
EN

Les traitements de chimiothérapie ou de radiobiologie visent à générer des cassures double brin (CDB) de l'ADN. Les cellules tumorales sont plus sensibles aux CDBs que les cellules saines en raison de leur phénotype et de leur génotype. Un axe important en radiobiologie est de combiner la radiothérapie avec des inhibiteurs des voies de réparation de l'ADN pour augmenter la radiosensibilité et pallier la résistance aux radiations de certaines cellules cancéreuses. Nos objectifs sont d’avoir une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires impliqués dans la voie NHEJ (Non Homologous End Joining) et decaractériser de nouveaux inhibiteurs spécifiques de cette voie. L'hétérodimère Ku70/Ku80 (Ku) peut recruter plusieurs facteurs de la voie NHEJ par des interactions directes et coordonne ainsi l'ensemble du NHEJ. De nombreuses interactions impliquent des motifs appelés KBM (Ku Binding Motif). Lorsque les extrémités des CDBs doivent être modifiées, des enzymes sont nécessaires pour corriger les extrémités avant l'étape finale de ligature. L'une de ces enzymes est la protéine Werner (WRN) qui possède deux motifs KBM. Au cours de ma thèse, j'ai réussi à produire plusieurs constructions de WRN et la protéine complète et je les ai étudiés en combinant plusieurs approches structurales. J'ai montré que WRN peut adopter plusieurs états oligomères en utilisant le SAXS et le SEC-MALS et que WRN interagissait directement avec Ku par le biais de deux motifs peptidiques, situés aux extrémités N-terminale et C-terminale. J'ai, également, déterminé la structure cryo-EM d'un complexe Ku-ADN lié au domaine exonucléase de WRN à 3Å de résolution. Nous avons montré que Ku recrute WRN par son motif KBM et positionne WRN près de l'ADN.