Thèse soutenue

Analyse de la biogénèse et caractérisation de vésicules extracellulaires recombinantes en vue d’applications biomédicales
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Auteur / Autrice : Aurore de Poret
Direction : Delphine Muriaux
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie Santé
Date : Soutenance le 15/12/2020
Etablissement(s) : Montpellier
Ecole(s) doctorale(s) : Sciences Chimiques et Biologiques pour la Santé
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Institut de Recherche en Infectiologie de Montpellier (Montpellier)
Jury : Président / Présidente : Cécile Gauthier-Rouvière
Examinateurs / Examinatrices : Delphine Muriaux, Cécile Gauthier-Rouvière, Stéphane Ory, Stéphanie Miserey-Lenkei, Robert Mamoun, Pascale Zimmermann
Rapporteurs / Rapporteuses : Stéphane Ory, Stéphanie Miserey-Lenkei

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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Les vésicules extracellulaires sont des vésicules produites par les cellules, entourées d’une bicouche lipidique et renfermant des protéines et des acides nucléiques ayant un rôle dans la communication entre cellules. La biogénèse de ces vésicules se fait selon deux voies principales. Les exosomes se forment dans les endosomes multivésiculaires tandis que les microvésicules bourgeonnent directement à la membrane plasmique des cellules. Les deux voies mettent en jeu des mécanismes cellulaires diverses et utilisent certaines protéines spécifiques parfois également utilisées par les rétrovirus pour sortir de leur cellule hôte. La capacité des vésicules extracellulaires à transporter des protéines et des acides nucléiques et à interagir avec des cellules cibles, expliquent le récent intérêt qui leur est porté pour des applications biomédicales. La société Ciloa (Ciloa SAS – Montpellier) a élaboré une stratégie permettant d’adresser une protéine d’intérêt dans les vésicules extracellulaires. Grâce à une séquence peptidique spécifique (appelée peptide pilote), des cellules en culture peuvent produire des vésicules extracellulaires recombinantes contenant une protéine d’intérêt. Des vésicules extracellulaires contenant la protéine d’intérêt CCR4 ont ainsi été produites et isolées selon un protocole établi par la société Ciloa. Les préparations de vésicules extracellulaires ainsi isolées ont ensuite été caractérisées par leur taille, leur morphologie et leur contenu protéique avec différentes méthodes. Les voies de biogénèse de ces vésicules extracellulaires dans les cellules productrices ont également été étudiées. Des expérience d’ELISA, western blot, d’immunocapture et de spectrométrie de masse ont ainsi permis de mettre en évidence la présence de protéines marqueurs des vésicules extracellulaires dans des vésicules contenant la protéine CCR4. Les différents instruments utilisés pour caractériser la taille et la morphologie des vésicules extracellulaires ont permis d’identifier la présence de particules sphériques de 30 à 120 nanomètres de diamètre environ.