Rôle de la tension de membrane dans la régulation spatiale de l'exocytose lysosomale
Auteur / Autrice : | Hugo Lachuer |
Direction : | Kristine Schauer, Bruno Goud |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biologie cellulaire et développement |
Date : | Soutenance le 05/09/2022 |
Etablissement(s) : | Université Paris sciences et lettres |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Complexité du vivant (Paris ; 2009-....) |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Biologie cellulaire et cancer (Paris ; 1995-....) - Biologie Cellulaire et Cancer |
établissement opérateur d'inscription : Institut Curie (Paris ; 1978-....) | |
Jury : | Président / Présidente : Olivia Du Roure |
Examinateurs / Examinatrices : Kristine Schauer, Bruno Goud, Aurélien Roux, Laura Picas, Thierry Galli | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Aurélien Roux, Laura Picas |
Résumé
L'exocytose lysosomale est impliquée dans plusieurs processus cellulaires, mais sa régulation spatio-temporelle est encore peu connue. En utilisant la microscopie de fluorescence à réflexion totale (TIRFM) et des outils de statistiques spatiales, nous avons observé que l’exocytose aléatoire n’était pas distribuée aléatoirement sur la face ventrale de la membrane plasmique de cellules RPE1, mais organisée en agglomérats sur plusieurs échelles de tailles. Même si le taux d’exocytose est régulé par le cytosquelette d’actine, des perturbations de l’actine ou des microtubules par des drogues n’altèrent pas la structure spatiale de l’exocytose lysosomale. Les événements d’exocytose apparaissent partiellement aux adhésions focales (AF) et leur agglomération est réduite quand la biogenèse des AF est inhibée. De plus, des modifications de la tension de membrane par des chocs hypo-osmotiques et des traitements au méthyl-β-cyclodextrine augmentent l’agglomération des événements d’exocytose. Pour explorer le lien entre AF et tension de membrane, des cellules ont été cultivées sur des micropatrons en forme d’anneau permettant de contrôler l’organisation spatiale des AF. En utilisation une combinaison de TIRFM et de microscopie imageant le temps de vie de fluorescence (FLIM), nous avons pu révéler l’existence d’un gradient de tension radial. En changeant le diamètre du micropatron, nous avons montré que nous pouvions contrôler l’importance de ce gradient et l’agglomération de l’exocytose. En conclusion, nos données indiquent que l’agglomération spatiale de l’exocytose lysosomale repose sur une organisation spatiale de la tension de membrane et la topologie des AF.