Le virus de l'hépatite E, caractérisation de ses usines virales et de sa réplicase
Auteur / Autrice : | Cyrine Bentaleb |
Direction : | Laurence Cocquerel, Cécile-Marie Aliouat |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Sciences de la vie et de la santé |
Date : | Soutenance le 24/01/2022 |
Etablissement(s) : | Université de Lille (2022-....) |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Biologie-Santé (Lille ; 2000-....) |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Center for Infection and Immunity of Lille - Centre d’Infection et d’Immunité de Lille - INSERM U 1019 - UMR 9017 - UMR 8204 |
Jury : | Président / Présidente : Anne Tailleux |
Examinateurs / Examinatrices : Annette Martin | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Emmanuelle Blanchard-Laumonnier, Stéphane Bressanelli |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Le virus de l’hépatite E (HEV) représente la première cause d’hépatite aiguë dans le monde. Certainsaspects fondamentaux de son cycle infectieux ont été dévoilés ces dernières années grâce audéveloppement d’outils d’étude. Notamment, au laboratoire, nous avons mis en place un systèmeefficace de culture cellulaire du HEV.La première partie de mon travail de thèse a consisté à caractériser les usines virales du HEV enutilisant des anticorps monoclonaux dirigés contre la protéine de capside ORF2, générés par notrelaboratoire. La caractérisation de ces anticorps a montré leur fonctionnalité dans différentesapproches expérimentales. De manière importante, ces anticorps anti-ORF2 ont permis de visualiserpour la première fois en microscopie électronique et confocale des structures induites spécifiquementpar le HEV. C’est ainsi que nous avons pu identifier un site cellulaire enrichi en membranes cellulaireset en protéines virales, qui est probablement impliqué dans l’acquisition de l’enveloppe autour desparticules virales HEV néosynthétisées. Ces résultats ont été validés par des études fonctionnelles enutilisant l’interférence par l’ARN. Nos analyses ont ainsi montré qu’une infection par le HEVs’accompagne d’un détournement du compartiment endosomal de recyclage (ERC) de la cellule hôte.L'ERC servirait d’usine virale pour le HEV.Dans la deuxième partie de mon travail de thèse, nous avons caractérisé la réplicase ORF1 du HEV pardifférentes approches, et cherché à définir si celle-ci subissait une maturation dans la cellule hôte.Pour cela, du fait de l’absence d’anticorps permettant de détecter la réplicase dans les systèmesréplicatifs, nous avons inséré différents épitopes dans l’ORF1. L’impact de l’insertion d’épitopes surl’efficacité de réplication a été mesuré et les constructions pour lesquelles la réplication n’était pasaffectée ont été sélectionnées. C’est ainsi que nous avons pu détecter l’ORF1, suivre son expressionau cours du temps, sa maturation et ceci dans trois systèmes d’expression différents : un systèmeinfectieux, un système de réplicon (unité autonome de réplication) et un système d’expressionhétérologue. De même, la localisation subcellulaire de l’ORF1 a été caractérisée en détails en utilisantdifférentes approches expérimentales. Au cours de ce projet, une nouvelle technologie appeléeRNAscope permettant d’étudier la distribution des ARN génomiques et sous-génomiques du HEV a étémise en place. En utilisant des approches de microscopie électronique, nous avons également cherchéà définir si, comme d’autres virus à ARN, le HEV induisait des remaniements membranaires dans lacellule infectée.En conclusion, mes travaux de thèse ont apporté de nombreuses connaissances nouvelles sur laréplicase virale et les interactions du HEV avec la cellule hôte.