Anticorps anti-FP4 et activation plaquettaire : développement d'un test fonctionnel innovant pour le diagnostic des Thrombopénies Induites par l'Héparine

Anti-PF4 antibodies and platelet activation : development of an innovative functional assay for the diagnosis of Heparin Induced Thrombocytopenia

• Auteur / Autrice : Noémie Charuel
• Direction : Claire Pouplard
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé
• Date : Soutenance le 10/05/2022
• Etablissement(s) : Tours
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Groupe Innovation et Ciblage Cellulaire (Tours)
• Jury : Président / Présidente : Yves Gruel
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Hélène Blasco, Marie-Christine Béné
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Isabelle Gouin-Thibault, Romaric Lacroix
• DOI : 10.70675/1743f61ez5f17z4867zb530ze7b4931a1baf

Mots clés

Mots clés contrôlés

Thrombocytopénie

Diagnostic

Héparines

Facteur d'activation des plaquettes

Sélectine P

Anticorps monoclonaux

Activation plaquettaire

Réactions antigène-anticorps

Technique immunoenzymatique

Mots clés libres

Thrombopénie

Héparine

Facteur plaquettaire 4

Diagnostic

Thrombopénies induites par l'héparine

Anticorps anti-FP4

Thrombocytopenia

Heparin

Platelet factor 4

Diagnosis

Activation

Platelets

Résumé

Les Thrombopénies Induites par l'Héparine (TIH) sont une complication rare mais sévère des traitements par l'héparine (H) dues à la synthèse d'anticorps (Ac) dirigés contre le FP4 modifié. Ces anticorps induisent une activation pluricellulaire, à l'origine des complications thrombotiques. Lors du diagnostic biologique, la pathogénicité de ces anticorps doit être évaluée par un test fonctionnel qui montre leur capacité à induire une activation plaquettaire héparine-dépendante. Nous avons développé, en cytométrie de flux, un nouveau test fonctionnel réalisé sur le sang total du patient. Deux marqueurs d'activation plaquettaire ont été évalués : l'expression de la P-sélectine et l'exposition des phosphatidylsérines. Le caractère innovant de notre test repose d'une part sur l'utilisation des plaquettes de patients et non celles de sujets sains, ce qui nous permet de nous affranchir de la variabilité de réponse plaquettaire aux Ac de TIH et d'augmenter ainsi la sensibilité de notre test diagnostic. D'autre part, nous standardisons l'expression de nos résultats en testant systématiquement l'anticorps monoclonal de TIH, 5B9, utilisé également comme contrôle interne de qualité. Ce test, relativement accessible et simple, est actuellement en phase de pré-industrialisation.

Heparin-induced thrombocytopenia (HIT) is a rare but serious complication of heparin (H) therapy due to the synthesis of antibodies (Abs) directed against modified FP4. These antibodies induce multi-cellular activation that leads to thrombotic complications. Biological diagnosis must demonstrate the pathogenicity of these antibodies through a functional test showing their ability to induce heparin-dependent platelet activation. We have developed a new functional test by flow cytometry performed on the patient's whole blood. Two platelet activation markers were evaluated: P-selectin expression and phosphatidylserine exposure. The innovative character of our test is based on the use of patient platelets and not of healthy subjects, which allows us to free ourselves from the variability of the platelet response to HIT Abs and thus to increase the sensitivity of our diagnostic test. On the other hand, we standardize the expression of our results by systematically testing the HIT monoclonal antibody, 5B9, also used as an internal quality control. This relatively accessible and simple test is currently in the pre-industrialization phase.