Thèse soutenue

De l’analyse fonctionnelle d’ARNt nucléotidyltransférases vers leur caractérisation par cristallographie sérielle sous rayonnement X

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Auteur / Autrice : Kévin Rollet
Direction : Claude SauterMario Mörl
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biophysique et biologie structurale
Date : Soutenance le 17/03/2022
Etablissement(s) : Strasbourg en cotutelle avec Universität Leipzig
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Architecture et réactivité de l'ARN (Strasbourg ; 1992-....)
Jury : Président / Présidente : Patrick Schultz
Examinateurs / Examinatrices : Irene Coin
Rapporteurs / Rapporteuses : Marie-Hélène Ledu, André Schneider

Résumé

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La dernière décennie marque d'importantes évolutions dans le domaine de la biologie structurale, en particulier dans la cristallographie sérielle aux rayons X résolue en temps. L’objectif de cette thèse en cotutelle entre les universités de Strasbourg et de Leipzig, était d’appliquer cette approche à la caractérisation fonctionnelle et structurale de trois CCA-adding enzymes. En combinant résultats biochimiques et méthodes de cristallisation avancées, nous avons pu : 1) déterminer l'affinité de liaison de nos candidats à divers substrats ainsi que les propriétés cinétiques des réactions catalysées , 2) obtenir des conditions reproductibles de production de cristaux pour les analyses standard et SSX,3) suivre les événements de nucléation et contrôler la cristallisation de certaines enzymes grâce au Xtal Controller, 4) acquérir des données sérielles in situ à température ambiante en puce microfluidique, 5) résoudre la structure d’une cible dans sa forme apo ou en complexe avec un ligand.