Développement et validation d'une méthode HPLC-MS/HRMS pour le criblage d'AINS dans la salive et le sang capillaire : application à l'étude de la prévalence des AINS dans l'ultratrail

Development and validation of a HPLC-MS/HRMS method for the screening of NSAIDs in oral fluid and dried blood spots : application on the study of the prevalence of consumption by ultratrail runners

• Auteur / Autrice : Mohammad Shafiq Mashal
• Direction : Jérôme Guitton, Christelle Machon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Pharmacologie-Toxicologie
• Date : Soutenance le 29/09/2022
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Interdisciplinaire Sciences-Santé (Villeurbanne ; 1995-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre de Recherche en Cancérologie de Lyon
• Jury : Président / Présidente : Anne-Laure Pelissier-Alicot
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Jean-Michel Gaulier, François Coudoré, Dominique Marcel-Chatelain
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Anne-Laure Pelissier-Alicot, Jean-Michel Gaulier, François Coudoré

Mots clés

Mots clés contrôlés

Ultra Trail du Mont Blanc

Sports

Médicaments -- Abus

Anti-inflammatoires non stéroïdiens

Innovation

Sportifs -- Examens médicaux

Mots clés libres

Anti-Inflammatoires non stéroidiens

Lc-Hrms

Salive

Sang capillaire

Ultratrail

Non-Steroidal anti-Inflammatory drugs

Lc-Hrms

Oral fluid

Dried blood spots

Ultratrail

Résumé

Les anti-inflammatoires non stéroidiens (AINS) sont l’un des médicaments les plus utilisés dans le monde, accessibles sur ordonnances ou en vente libre. Plusieurs articles ont fait état d’une forte consommation d’AINS par des coureurs pendant les ultratrails. Plusieurs études montrent qu’environ 50% des coureurs utillisent des AINS sans ordonnance médicale, sans forcément connaître leurs effets indésirables et leur toxicité. A ce jour, seulement des données basées sur des questionnaires ont été rapportées sur la prévalence des AINS chez les ultratrailers. Or, en raison de la méconnaissance des coureurs concernant les AINS, l’utilisation du questionnaire peut entraîner des résultats faux positifs ou faux négatifs. Dans cette étude, nous avons étudié la prévalence des AINS chez les utratrailers via des prélèvements de salive et sang capillaire. Des protocoles de préparation d’échantillon et une méthode LC-MS/HRMS ont été développés puis validés pour 19 AINS dans la salive et pour 18 AINS dans le sang capillaire. La méthode a été appliquée avec succès sur des échantillons collectés auprès de participants de l’Ultratrail du Mont Blanc® (UTMB®) 2021. Les résultats ont montré une prévalence des AINS supérieure dans les prélèvements de sang capillaire (46,6%) que dans les prélèvements salivaires (18,5%) ainsi qu’à partir des données du questionnaire (13,8%). En conclusion, ce travail est le premier rapportant l’identification et la quantification d’autant d’AINS dans la salive et le sang capillaire. De plus, l’étude menée lors de l’UTMB® 2021 a montré que la recherche d’AINS dans le sang capillaire est le moyen le plus pertinent pour étudier la prévalence dans l’ultratrail.

Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are one of the most used drugs worldwide accessible through medical prescription or over-the-counter (OTC). Several published articles have reported a high consumption of NSAIDs by runners during ultratrail. Pain relief and prevention are the main reasons for these drugs consumption by runners. Several studies reported that around 50% runners used NSAIDs without medical prescription, these data show that half of runner may have low information or even lack of information about NSAIDs adverse effects. Up to date, only questionnaire-based data reported about NSAIDs prevalence by the runners. Therefore, using questionnaire may not provide the right information and leads to false positive or false negative results. In this study, we used oral fluid (OF) and dried blood spots (DBS), as biological samples for the study of NSAIDs consumption prevalence by the runners. Sample preparation workflows and a LC-MS/HRMS analytical method were developed and validated according to European Medicines Agency guideline for 19 and 18 different NSAIDs in OF and DBS, respectively. The method was successfully applied on OF and DBS samples collected from Ultramarathon du Mont Blanc® 2021. Results showed a higher prevalence of NSAIDs using DBS (46.6%) than OF (18.5%) and questionnaire (13.8%). To conclude, this work is the first one that reported a LC-MS/HRMS method for identification and quantification of as many NSAIDs in oral fluid and dried blood spots. Moreover, the prospective study conducted on UTMB® 2021 showed that the analysis of drugs directly in DBS is the most relevant tool to determine the prevalence in ultratrail events.