Caractérisation structurale et fonctionnelle de la forme dimérique de la protéine Alix
Auteur / Autrice : | Nolwenn Miguet |
Direction : | Winfried Weissenhorn |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biologie structurale et nanobiologie |
Date : | Soutenance le 16/12/2022 |
Etablissement(s) : | Université Grenoble Alpes |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale chimie et science du vivant (Grenoble ; 199.-....) |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Institut de biologie structurale (Grenoble) |
Equipe de recherche : Groupe Entrée et bourgeonnement des virus à enveloppe | |
Jury : | Président / Présidente : Rob W. H. Ruigrok |
Examinateurs / Examinatrices : Marie-Odile Fauvarque, Delphine Muriaux | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Yves Gaudin, Patrice Gouet |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Mots clés libres
Résumé
Les membranes cellulaires sont des entités hautement dynamiques. Elles subissent au cours du temps, des processus continus de remodelage, de fusion, de bourgeonnement ou de fission. Il a été démontré depuis quelques années que ces processus de remodelage des membranes, incluant entre autres, la formation de vésicules intraluménales, la formation d’endosomes, le bourgeonnement viral, la cytokinèse, la réparation membranaire, l’apoptose des neurones, la formation des pores nucléaires et la réparation de l’enveloppe nucléaire, sont médiés par les composants d'une machine multiprotéique connue sous le nom d’ESCRT (Endosomal Sorting Complex Required for Transport).Alix (ALG-2 interacting protein-X) est une protéine accessoire cytosolique qui est étroitement associée à la fonction des complexes ESCRT. Alix est composée d'un domaine Bro1 N-terminal lié à un domaine central coiled-coil en forme de V et d'un domaine C-terminal riche en proline. Notre laboratoire et d’autres équipes ont montré qu’Alix était capable de dimériser via son domaine V central, fonction nécessaire entre autres pour le bourgeonnement du VIH-1.Dans un premier temps, nous avons résolu la structure du domaine V dimérique. La structure cristalline révèle un échange de domaine du premier protomère avec le second protomère : on parle de « swapp dimer ». Nous avons ensuite réalisé un complexe entre la forme entière de la protéine et de son partenaire Alg-2 et initié le travail de résolution de la structure par microscopie électronique.Enfin, nous avons mis en évidence la faculté de la protéine Alix à déformer les membranes. En effet, nous avons confirmé qu’Alix provoque la fusion des liposomes en condition acide, par plusieurs techniques : la microscopie électroniques, L'analyse de la distribution de la taille des liposomes au nanosight et des tests de fluorescence. Enfin, l’oligomérisation de la protéine en présence de liposomes a été étudiée.L’ensemble de ces résultats donne les toutes premières informations structurales de cette forme active dimérique de la protéine Alix et confirme son implication dans les processus de remodelage membranaire.