Vers une démocratisation de l’utilisation de la cytométrie en flux pour le diagnostic et le suivi de l’allergie
Auteur / Autrice : | Rihane Arif-Lusson |
Direction : | Jean-Louis Mège, Jean-Marc Busnel |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biologie santé. Immunologie |
Date : | Soutenance le 13/09/2022 |
Etablissement(s) : | Aix-Marseille |
Ecole(s) doctorale(s) : | Ecole Doctorale Sciences de la Vie et de la Santé (Marseille) |
Partenaire(s) de recherche : | Equipe de recherche : Méditerranée Infection |
Laboratoire : Mephi (Marseille) | |
Entreprise : Immunotech-Beckman Coulter | |
Jury : | Président / Présidente : Nathalie Bardin |
Examinateurs / Examinatrices : Joana Vitte | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Jocelyne Just, Marie-Christine Béné |
Mots clés
Résumé
L’allergie représente un problème majeur de santé public. Le test de provocation orale constitue l’étalon-or du diagnostic de l’allergie. Cependant, pouvant induire de graves réactions cliniques, il se réalise à l’hôpital. D’autre part, les tests cutanés et sérologiques permettent d’étudier le profil de sensibilisation d’un individu à des allergènes (présence d’IgE spécifiques). Ces approches nécessitent une interprétation rigoureuse et permettent d’orienter de diagnostic de l’allergie. Le test d’activation des basophiles (TAB) est un test cellulaire fonctionnel qui représente une approche unique en allergologie. Bien que sa pertinence et son utilité soient établies, du fait de limitations techniques, son utilisation reste limitée à des laboratoires spécialisés. Afin que toutes les capacités du TAB puissent être exploitées, une levée de ces limitations est indispensable. L’objectif de cette thèse a été de travailler à une amélioration technique du TAB. Nous avons simplifié la chaîne pré-analytique du TAB. L’approche développée utilise une innovation technologique (DURA Innovation, Beckman Coulter) permettant l’emploi de réactifs secs, stables à température ambiante et prêts à l’emploi. La méthode se fait sur du sang total, sans étape de lavage, ne nécessite que 4 étapes de pipetage et, malgré l’utilisation d’un cocktail d’anticorps de 5 couleurs, sans compensation lors de l’analyse au cytométre. La méthode développée a été mise en œuvre dans différentes études constituant le volet clinique de la thèse. Nous avons aussi démontré la possibilité de miniaturiser le TAB en le transposant au format plaque 96 puits avec une préparation des échantillons totalement automatisée.