Développements pour l'imagerie quantitative et à haut contenu en microscopie de fluorescence classique et super-résolue
Auteur / Autrice : | Adrien Mau |
Direction : | Sandrine Lévêque-Fort, Nicolas Bourg |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Physique |
Date : | Soutenance le 12/03/2021 |
Etablissement(s) : | université Paris-Saclay |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Ondes et Matière |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Institut des sciences moléculaires d'Orsay (2010-....) |
référent : Faculté des sciences d'Orsay | |
Entreprise : Abbelight (2016-....) | |
Jury : | Président / Présidente : Antigoni Alexandrou |
Examinateurs / Examinatrices : Gilles Tessier, Laurent Héliot, Nathalie Westbrook, Marc Tramier | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Gilles Tessier, Laurent Héliot |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Mots clés libres
Résumé
La microscopie de fluorescence et la microscopie de localisation de molécules uniques (SMLM) permettent d’imager spécifiquement les entités subcellulaires et sont donc des outils indispensables en Biologie. Cependant ces techniques d’imagerie sont intimement liées aux propriétés de l’illumination, qui possède des limites en termes d’uniformité et de contrôle de l’éclairement.Nous proposons une nouvelle méthode d’illumination nommée ASTER (Adaptable Scanning for Tunable Excitation Regions), capable de délivrer une illumination modulable et uniforme, et compatible avec les méthodes de sectionnement optique classiques. Nous l’appliquons en premier lieu à la microscopie de fluorescence où nous montrons sa compatibilité avec l’imagerie d’échantillons vivants. Ensuite, dans le contexte de l’imagerie SMLM nous démontrons l’obtention de résolutions uniformes, mais également l’impact sur d’autres paramètres et possibilités d’acquisitions. Ainsi ASTER permet de réduire le fond ambiant, d’imager des champs larges de 200x200µm² ou de réaliser une image SMLM sur l’ordre de quelques minutes.Nous présentons ensuite le bénéfice du couplage d’ASTER avec l’imagerie 3D, et une méthode d’imagerie multi-couleur SMLM. Cette méthode quantifiée analytiquement permet d’obtenir des cross talk de l’ordre de 2%, nous montrons sont application à l’imagerie à deux et trois couleurs, ainsi qu’à l’imagerie 3D. Différentes pistes d’amélioration d’ASTER et de l’imagerie multi couleur sont ensuite proposées.