Impact du checkpoint inhibiteur HLA-G/ILT2 sur la réponse immune anti-tumorale dans les cancers urologiques

Impact of the HLA-G/ILT2 inhibitory checkpoint on the anti-tumor immune response in urologic cancers

• Auteur / Autrice : Alix Jacquier
• Direction : Nathalie Rouas-Freiss
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance le 11/02/2021
• Etablissement(s) : Université Paris Cité
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Bio Sorbonne Paris Cité (Paris ; 2014-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Immunologie humaine, physiopathologie & immunothérapie (Paris)
• Jury : Président / Présidente : François Desgrandchamps
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : François Desgrandchamps, Laurence Amiot, Danièle Bensoussan-Lejzerowicz, Edgardo D. Carosella
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Laurence Amiot, Danièle Bensoussan-Lejzerowicz

Mots clés

Mots clés contrôlés

Lymphocytes T

Cancer

Rein

Inhibiteurs de points de contrôle immunitaire

Immunothérapie anticancéreuse

Mots clés libres

HLA-G/ILT2

Immune checkpoint

PD1/PD-L1

LT

Cancer du rein

Immunothérapie

HLA-G/ILT2

Immune checkpoint

PD1/PD-L1

T cells

Renal carcinoma

Immunotherapy

Résumé

Le développement de l'immunothérapie à travers l'inhibition des immune checkpoints a révolutionné le domaine de la cancérologie. Cependant, malgré l'efficacité de ces thérapies, certains patients demeurent résistants à ces traitements. L'expression hétérogène des immune checkpoints est une des hypothèses avancées pour expliquer cette résistance, il est donc crucial d'identifier de nouvelles cibles afin de combiner plusieurs thérapies. Dans ce contexte, l'expression du checkpoint inhibiteur HLA-G a été observée dans plusieurs lésions tumorales et en particulier dans les carcinomes rénaux à cellules claires (ccRCC), associée ou non à d'autres immune checkpoints. L'effet inhibiteur d'HLA-G sur les effecteurs immunitaires a déjà été démontré par plusieurs études, néanmoins afin d'identifier son impact directement sur les cellules immunitaires exprimant son récepteur ILT2, j'ai mis au point un protocole d'analyse basé sur la cytométrie en flux. Cette méthode nous a permis de caractériser sur le plan phénotypique et fonctionnel les lymphocytes T CD8+ ILT2+ et CD4+ILT2+ périphériques et infiltrants les ccRCC. Les lymphocytes T CD8+ILT2+ et CD4+ILT2+ présentent un phénotype mémoire terminal et fortement cytotoxique, et sont fonctionnellement inhibés lorsqu'HLA-G est exprimé par une cellule cible, comme c'est le cas des cellules tumorales. Dans un second temps je me suis intéressée à la relation ontogénique entre les cellules T CD8+PD1+ et CD8+ILT2+, ces derniers présentant un phénotype mémoire plus différencié que les premiers. En utilisant un protocole de stimulation in vitro dans un système de coculture autologue entre les lymphocytes infiltrants et les cellules tumorales, les résultats obtenus montrent que sous l'effet d'un inhibiteur de PD1/PD-L1 une population de LT CD8+ILT2+ pouvait émerger et proliférer. Dans le cas d'une immunothérapie ciblant PD1/PD-L1, les lymphocytes T CD8+PD1+ pourraient donc exprimer ILT2 et être alors inhibés par HLA-G exprimé par les cellules tumorales, ce qui conduirait à terme à un échec de la thérapie. L'objectif de ce travail est de démontrer à terme la relevance du checkpoint HLA-G/ILT2 comme nouvelle cible thérapeutique en oncoimmunologie.

The development of immunotherapy through the inhibition of immune checkpoints has revolutionized the field of oncology. However, despite the effectiveness of these therapies, some patients remain resistant to them. Heterogeneous expression of immune checkpoints is one of the hypotheses put forward to explain this resistance, so it is crucial to identify new targets in order to combine several therapies. In this context, the expression of the inhibitory molecule HLA-G has been observed in several tumor lesions and in particular in clear cell renal carcinoma (ccRCC), whether or not associated with other immune checkpoints. The inhibitory effect of HLA-G on immune effector cells has already been demonstrated by several studies, however in order to identify its impact directly on immune cells expressing its receptor, ILT2, I have developed a functionnal assay protocol based on flow cytometry. This method allowed us to characterize phenotypically and functionally peripheral and tumor-infiltrating CD8+ILT2+ and CD4+ILT2+ T cells in ccRCC patients. CD8+ILT2+ and CD4+ILT2+ T cells display a terminal memory and highly cytotoxic phenotype, and are functionally inhibited by target cell expression of HLA-G. In a second step, I investigated the ontogenic relationship between CD8+PD1+ and CD8+ILT2+ T cells, the latter having a more differentiated memory phenotype than the former. Using an in vitro stimulation protocol in an autologous co-culture system between infiltrating lymphocytes and tumor cells, the results showed that under PD1/PD-L1 inhibition a CD8+ILT2+ T cells population could emerge and proliferate. In case of an immunotherapy targeting PD1/PD-L1, CD8+PD1+ T cells could therefore express ILT2 and then be inhibited by tumor cells expressing HLA-G, which would eventually lead to a failure of the therapy. This work aims to demonstrate the relevance of the HLA-G/ILT2 checkpoint as a new therapeutic target in oncoimmunology.