Caractérisation des lymphocytes B auto-réactifs dans le syndrome de Sjögren

Characterisation of autoreactives B cells in Sjögren's syndrome

• Auteur / Autrice : Nedra Chriti
• Direction : Divi Cornec
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance le 19/11/2021
• Etablissement(s) : Brest
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Biologie-Santé (Nantes)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Lymphocytes B et Autoimmunité (Brest, Finistère)
• Jury : Président / Présidente : Sylvaine You
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Divi Cornec, Sylvaine You, Claire Immediato-Daien, Hugo Mouquet, Yves Allenbach
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Claire Immediato-Daien, Hugo Mouquet

Mots clés

Mots clés contrôlés

Lymphocytes B

Syndrome de Gougerot-Sjögren

Mots clés libres

Syndrome de Sjögren

Lymphocytes B

LB auto-réactifs

Auto-immunité

Tolérance

Sjögren’s syndrome

B cells

Autoreactive B cells

Autoimmunity

Autoimmunity tolerance checkpoints

Résumé

Les LB jouent un rôle central dans le syndrome de Sjögren primitif (SSp), cependant très peu d’études ont été réalisées sur les caractéristiques des LB auto-réactifs qui sécrètent des autoanticorps contre l'auto-antigène SSA.Nous avons cherché à caractériser les LB circulants spécifiques de la SSA (LB SSA+), afin de mieux comprendre les mécanismes conduisant à la rupture de la tolérance chez les patients atteints du SSp.En utilisant une méthode de cytométrie en flux, basée sur la spécificité du BCR, nous avons détecté et caractérisé phénotypiquement les LB SSA+ circulants chez des patients atteints de SSp et chez des contrôles sains (HCs). Nous avons testé leur capacité à sécréter des immunoglobulines spécifiques de la SSA in vitro après stimulation. Ensuite, nous avons réalisé une première expérience de profilage transcriptionnel de ces cellules par RNA seq unicellulaire afin de mieux comprendre le rôle des LB auto-réactifs chez les sujets sains.L'analyse du phénotype a montré une expansion d'un sous-ensemble de LB naïfs CD19+IgD+CD27-CD21low/-CD11c-SSA+ avec un BCR régulé à la baisse chez les patients atteints de SSp.Les LB SSA+ étaient également enrichis parmi les LB mémoires non commutés IgMlow chez les patients, ainsi que dans les LB mémoires DN (IgD-CD27-) et commutés des différents isotypes. Les LB SSA+ triés, provenant d'un sujet sain, étaient capables de sécréter in vitro des immunoglobulines IgM mais pas IgG anti-SSA, contrairement aux LB SSA+ provenant de patients atteints de SSp, qui sont capables de sécréter des autoanticorps IgG spécifiques de SSA. Sur le plan transcriptomtique, les DEG du cluster enrichi en LB SSA+ ont montré une régulation positive des gènes HLA impliqués dans la présentation de l'antigène ainsi qu’une régulation négative du BCR par la surexpression de CD72.Nos résultats suggèrent que les LB SSA+ auto-réactifs, chez les patients atteints de SSP, sont enrichis dans le compartiment mémoire, ce qui suggère qu'ils échappent aux différents points de contrôle de la tolérance périphérique et se différencient in vivo encellules sécrétant des anticorps anti-SSA.

B cells play a central role in primary Sjögren's syndrome (pSS), but little is known about the autoreactive B cells that secrete autoantibodies against the autoantigen SSA. Here, we aimed to characterize the circulating SSAspecific B cells (SSA+ B cells), in order to better understand the mechanisms leading to the breakdown of self-tolerance in patients with pSS.Using a flow-cytometry-based method, we detected and phenotypically characterized SSA+ B cells among peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) collected from patients with pSS and from healthy controls (HCs). We tested their ability to secrete SSA-specific immunoglobulins in vitro following stimulation. Then, we performed a first experience of transcriptional profiling of these cells by single-cell RNA seq to understand further the characteristics of these autoreactive B cells in healthy subjects.Phenotype analysis showed an expansion of a CD19+IgD+CD27-CD21low/-CD11c-SSA+ naïve B-cell subset with a downregulated B cell receptor in pSS patients.SSA+ B cells were also enriched within the IgMlow unswitched memory B-cell subset in patients, as well as in double negative (IgD-CD27-) and switched memory B cells of the different isotypes. Sorted SSA+ B cells from HCs were able to secrete in vitro IgM but not IgG anti-SSA immunoglobulins contrary to SSA+ B cells from pSS patients, that were able to secrete IgG autoantibodies. From the scRNA-seq analysis in a healthy subject, we obtained 6 clusters with 2 enriched in SSA+ B cells. DEG from clusters enriched with SSA+ B cells, showed upregulation of HLA genes implicated in the antigen presentation and negative regulation of BCR.Our results show that autoreactive SSA+ B cells in pSS patients maturate and reach the memory compartment, suggesting that they escape to the different layers of peripheral tolerance checkpoints and differentiate in vivo into anti-SSA antibody-secreting cells.