YAP comme régulateur du programme de réplication de l'ADN
Auteur / Autrice : | Rodrigo Meléndez García |
Direction : | Muriel Perron, Odile Bronchain |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie |
Date : | Soutenance le 30/09/2020 |
Etablissement(s) : | université Paris-Saclay |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Signalisations et réseaux intégratifs en biologie |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : Institut des neurosciences Paris-Saclay (Gif-sur-Yvette, Essonne ; 2015-....) |
référent : Université Paris-Saclay. Faculté de médecine (Le Kremlin-Bicêtre, Val-de-Marne ; 2020-....) | |
Jury : | Président / Présidente : Sarah Lambert |
Examinateurs / Examinatrices : Jean-Charles Cadoret, Muriel Umbhauer, Luc Paillard | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Jean-Charles Cadoret, Muriel Umbhauer |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Une cellule souche est capable de s’auto-renouveler et de générer des cellules différenciées après division cellulaire. La duplication complète de son génome doit être exempte d'erreurs afin d'éviter la propagation aux cellules filles de mutations délétères. Chez les eucaryotes, il a été montré que des segments d’ADN sur les chromosomes se répliquent de manière coordonnée et à des moments définis pendant la phase de synthèse, un processus appelé programme spatio-temporel de réplication de l'ADN (RT). Des changements majeurs dans le RT sont corrélés avec les changements de détermination des cellules souches et associés à l'organisation et à l’expressivité du génome. Malgré ce rôle central, les mécanismes qui sous-tendent le contrôle du RT restent méconnus. Mon laboratoire a mis en évidence que YAP, l'effecteur en aval de la voie de signalisation Hippo impliquée dans la croissance cellulaire, régule la vitesse et la chorégraphie de la réplication de l’ADN des cellules souches rétiniennes chez l’amphibien xénope. Ces données révèlent YAP comme un nouvel acteur moléculaire dans le contrôle du RT. Pour tester l’implication directe de YAP dans la dynamique de réplication de l’ADN, nous avons tiré profit du système in vitro d’extraits d'œufs de xénope dans lequel toutes les étapes du processus sont reproduites de manière synchrone. Nous montrons que YAP est recruté à la chromatine pendant la réplication et que ce processus se produit seulement après la phase d’initiation des origines de réplication. Des extraits déplétés de la protéine YAP présentent une accélération de la vitesse de réplication et une augmentation du nombre de sites d’activation de la synthèse de l’ADN. Par ailleurs, nous avons identifié RIF1 (Rap1-Interacting Factor 1 ou Replication Timing Regulatory Factor 1), un des rares régulateurs connus du RT, comme un nouveau partenaire de YAP. Comme pour YAP, la perte de fonction de RIF1 dans les embryons de xénope conduit à un phénotype de petit œil et à la dérégulation du RT dans les cellules souches rétiniennes.Dans l'ensemble, nos résultats montrent l’implication de YAP dans le contrôle de la dynamique de réplication de l’ADN et révèlent RIF1 comme un nouveau partenaire dans ce processus. Ce travail ouvre de nouvelles perspectives d’étude quant à l’importance biologique de cette interaction YAP-RIF1 dans le contrôle du RT et sa pertinence comme cible pour influencer le devenir des cellules souches.