Etude du mécanisme d'endocytose du Virus de l'Hépatite B (VHB)

Study of Hepatitis B virus endocytosis

• Auteur / Autrice : Charline Herrscher
• Direction : Emmanuelle Blanchard-Laumonnier
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie et de la santé. Virologie
• Date : Soutenance le 14/09/2020
• Etablissement(s) : Tours
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Morphogénèse et antigénicité du VIH et des virus des hépatites et émergents. Tours
• Jury : Président / Présidente : Patrick Vourc'h
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Julie Lucifora, Camille Sureau
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Eloi Verrier, Mirjam Zeisel

Mots clés

Mots clés contrôlés

Lignées cellulaires

Facteur de croissance des hépatocytes

Médicaments -- Récepteurs

Récepteurs cellulaires

Actine

Tests de toxicité in vitro

Entrée virale

Endocytose

Modèles animaux

Virus de l'hépatite B

Prévention

Hépatite B

Mots clés libres

Récepteurs NTCP

Récepteur NTCP

Clathrine

Hepatitis B virus

Viral entry

Endocytosis

NTCP receptor

Résumé

Les étapes précoces de l’infection virale sont des évènements critiques dans le déroulement du cycle viral. Ainsi, l’entrée virale constitue la première étape d’interaction entre un virus et sa cellule hôte permettant d’initier, de maintenir et de propager l’infection. Alors qu’un vaccin existe depuis plus de 40 ans, l’entrée cellulaire du Virus de l’Hépatite B (VHB) reste encore mal connue, elle constitue pourtant, une cible attractive pour le développement de nouvelles stratégies antivirales thérapeutiques et/ou prophylactiques. L’un des obstacles majeurs à la compréhension de l’entrée virale a longtemps été imputé aux modèles cellulaires d’étude du VHB qui étaient alors, inadaptés pour étudier finement les mécanismes moléculaires impliqués dans les étapes d’internalisation de ce virus. Pour explorer cette phase du cycle cellulaire, nous avons modifié les conditions d’infection in vitro afin d’obtenir un modèle plus « physiologique » et adapté à l’étude précoce des phases d’infection. En nous appuyant sur ce nouveau protocole, nous avons investigué les potentielles voies d’endocytose du VHB. Ainsi, nous avons pu montrer que l’internalisation du VHB était dépendante de la voie clathrine dans la lignée cellulaire hépatocytaire, HepG2-NTCP. En effet, cette endocytose nécessite la présence de certaines protéines cellulaires telles que la clathrine, l’adaptateur AP-2, la dynamine et son entrée est dépendante de l’actine. Pour aller plus loin, nous avons également développé un nouveau modèle cellulaire hépatocytaire exprimant le NTCP afin d’évaluer cette susceptibilité virale. Les résultats obtenus concourent à une meilleure compréhension des étapes clés du cycle viral nécessaire à la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques.

The early steps during viral infection are critical events in the course of viral life cycle as they constitute the first interaction between virus and its host cell leading to infection. Despite the development of an efficient vaccine for more than 40 years, mechanisms of Hepatitis B virus (HBV) entry remain poorly understood. Studies of this key step had long been hampered by the lack of efficient cell culture systems allowing a detailed understanding of HBV uptake. By elaborating new experimental conditions to infect the cells we deciphered HBV endocytosis pathways and demonstrated that HBV enters HepG2-NTCP cell line by clathrin-mediated endocytosis. Indeed, to achieve an efficient infection HBV depends on cellular proteins such as clathrin, adaptator AP-2 or dynamin and requires actin cytoskeleton. To go even further, we also developed a new hepatic cell line overexpressing NTCP in order to evaluate susceptibility to HBV infection. Results obtained contribute to a better understanding of HBV life cycle to develop new therapeutic strategies.