La nécroptose : une nouvelle cible thérapeutique dans la stéatohépatite non-alcoolique

Necroptosis : a new therapeutic target in Non-Alcoholic Steatohepatitis

• Auteur / Autrice : Amine Majdi
• Direction : Jérémie Gautheron, Chantal Housset
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Physiologie, Physiopathologie et Thérapeutique
• Date : Soutenance le 12/11/2020
• Etablissement(s) : Sorbonne université
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Physiologie, Physiopathologie et Thérapeutique (Paris ; 2000-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre de recherche Saint-Antoine (Paris ; 2009-....)
• Jury : Président / Présidente : Karine Clément
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Gilles Courtois, Sophie Nadaud
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Catherine Postic, Marie-Thérèse Dimanche-Boitrel

Mots clés

Mots clés contrôlés

Mort cellulaire

Thérapeutique

Étiologie

Stéatose hépatique non alcoolique

Stéatose hépatique

Mots clés libres

Stéatose hépatique

Stéatohépatite non-alcoolique

Nécroptose

Non-alcoholic fatty liver disease

Non-alcoholic steatohepatitis

Necroptosis

Résumé

La progression de la NAFLD vers le stade de la NASH est positivement corrélée à la mort des hépatocytes. La nécroptose, une voie de mort programmée, a récemment été identifiée comme un acteur de cette progression. Cette thèse dresse le potentiel des médiateurs de la nécroptose RIPK1, RIPK3 et MLKL comme cibles thérapeutiques de la NAFLD. Méthodes : L’expression hépatique et les concentrations plasmatiques de RIPK1, RIPK3 et MLKL ont été évaluées chez les patients atteints de la NAFLD. Des souris C57/BL6J développant une NAFLD ont été traitées par RIPA-56, un inhibiteur de RIPK1, pendant 12 semaines (PRO) ou 4 semaines (CUR). Des souris Ripk3-/- sous régime CDAA ont été euthanasiées à 32 ou 66 semaines afin de clarifier l’impact de RIPK3 dans le développement de la NAFLD. De plus, des cultures primaires d’hépatocytes humains stéatosiques ont été traités par RIPA-56 ou NSA, un inhibiteur de MLKL. L’invalidation de MLKL dans une lignée hépatocytaire murine AML-12-MLKL-KO a permis d’élucider son implication dans le métabolisme des lipides. Résultats : L’inhibition de RIPK1 entraîne une régulation négative des médiateurs RIPK3 et MLKL dans le foie. La stéatose, la cytolyse hépatique, l’inflammation et la fibrose sont drastiquement diminués (CUR), voire normalisés (PRO). Les expériences in vitro sont en accord avec ces résultats. La lignée AML-12-MLKL-KO et les souris RIPK3-/- ont une respiration mitochondriale et une β-oxydation améliorées. Chez l'humain, l’expression de RIPK3 corrèle positivement avec les scores d’inflammation et de fibrose. Conclusion : Inhiber la voie de la nécroptose empêche le développement de la NASH.

In NAFLD, hepatocytes can undergo necroptosis: a regulated form of necrotic cell death mediated by RIPK1. Herein, we assessed the potential of RIPK1, RIPK3 & MLKL to act as therapeutic targets in NAFLD. Methods: The effect of RIPA-56, a specific inhibitor of RIPK1, was evaluated in HFD-fed mice and in primary human steatotic hepatocytes (PHH). Wild-type or Ripk3-/- mice were fed a CDAA diet or an isocaloric control diet for 32 and 66 weeks. RIPK1, RIPK3 & MLKL concentrations were measured in the serum of patients with NAFLD. RIPK1, RIPK3 and MLKL mRNA levels were measured in patients with variable NAFLD severity. Results: When used as either a prophylactic or curative treatment, RIPA-56 caused a downregulation of MLKL and a reduction of liver injury, inflammation and fibrosis, characteristic of NASH, as well as of steatosis. This effect was reproduced by treating PHH with RIPA-56 or NSA (an inhibitor of MLKL), and by knockout of MLKL in fat-loaded AML-12 mouse hepatocytes. MLKL-KO led to activation of mitochondrial respiration and an increase in β-oxidation in steatotic hepatocytes. Along with decreased MLKL activation, RIPK3-/- mice exhibited increased activities of the liver mitochondrial respiratory chain complexes in experimental NASH. In patients with NAFLD, serum concentrations of RIPK1, RIPK3 & MLKL increased in correlation with activity. RIPK3 expression gradually increased with histological severity and correlated with inflammation grade and fibrosis stage. Conclusion: RIPK1 inhibition improves NASH features and reverses steatosis via an MLKL-dependent mechanism that partly involves an increase in mitochondrial respiration.