Thèse soutenue

Étude de l'exocytose vésiculaire par détection couplée électrochimie-microsocopie de fluorescence
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Auteur / Autrice : Justine Pandard
Direction : Manon Guille
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Physico-Chimie analytique
Date : Soutenance le 19/06/2020
Etablissement(s) : Sorbonne université
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Chimie physique et chimie analytique de Paris Centre (Paris ; 2000-....)
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Processus d'activation sélectif par transfert d'énergie uni-électronique ou radiatif (Paris ; 1998-....)
Jury : Président / Présidente : Emmanuel Maisonhaute
Examinateurs / Examinatrices : Frédéric Lemaître
Rapporteurs / Rapporteuses : Sabine Szunerits, Stéphane Marinesco

Résumé

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L’exocytose vésiculaire constitue un mécanisme fondamental impliqué dans une multitude de processus biologiques tels que la neurotransmission ou la libération d’hormones dans le sang. Depuis une dizaine d’années, la mise en place d’une détection couplée pour l'étude de ce phénomène a été mise en place au laboratoire PASTEUR de l’ENS. Elle implique notamment le couplage de l'Ampérométrie sur ultramicroélectrodes et de la Microscopie de Fluorescence par Réflexion Totale Interne (TIRFM), à l’aide de l’utilisation d’un matériau d’ITO, transparent et conducteur. Cependant, l’acquisition d’événements couplés s’accompagne de la présence d’événements dit «orphelins», ce qui soulève des interrogations quant au choix des sondes utilisées. Dans le cadre de cette thèse, de nouvelles sondes électro-fluorescentes, de la famille des «Faux Neurotransmetteurs Fluorescents» (FFNs) ont été développées et synthétisées. Une optimisation rationnelle de leur structure a été menée afin d’obtenir une molécule, appelée FFN42, aux caractéristiques électrochimiques et fluorescentes adaptées à la détection couplée. Les propriétés physico-chimiques, électrochimiques et optiques de cette sonde ont été étudiées. Son aptitude à être internalisée par les vésicules sécrétrices de cellules BON N13 a également été attestée. De plus, l’utilisation de FFN42 comme sonde duale unique pour le suivi d’évènements a été validée par ampérométrie sur fibre de carbone et par microscopie TIRFM séparément. Grâce à l'utilisation de cette sonde pour l'étude de l'exocytose par détection couplée et d’un dispositif d’ITO adapté, nous espérons pouvoir mettre en évidence certaines propriétés du phénomène exocytotique