Investigation de l'équilibre transglycosylation/hydrolyse chez les glycoside hydrolases agissant avec rétention de configuration
Auteur / Autrice : | Jiao Zhao |
Direction : | Régis Fauré, Michael O'Donohue |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Ingénieries microbienne et enzymatique |
Date : | Soutenance le 28/04/2020 |
Etablissement(s) : | Toulouse, INSA |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Sciences écologiques, vétérinaires, agronomiques et bioingénieries (Toulouse) |
Partenaire(s) de recherche : | Laboratoire : TBI - Toulouse Biotechnology Institute, Bio & Chemical Engineering - Toulouse Biotechnology Institute / TBI |
Jury : | Président / Présidente : Antoni Planas |
Examinateurs / Examinatrices : Régis Fauré, Michael O'Donohue, Caroline Remond-Zilliox, Marco Moracci, Sébastien Fort, Isabelle Andre, Gerlind Sulzenbacher | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Caroline Remond-Zilliox, Marco Moracci, Sébastien Fort |
Mots clés
Résumé
La synthèse de sucres est importante et pertinente, car applicable au développement de diagnostics et de molécules thérapeutiques. Cependant, la glycochimie reste laborieuse, en particulier pour la synthèse de furanosides, ce type de synthèse figurant parmi les plus difficiles à réaliser. Néanmoins, les furanosides sont d’intérêt, étant présents dans de nombreux biopolymères et chez certains microorganismes pathogènes. Ainsi il est pertinent d’étudier les furanoside hydrolases en tant qu’outils glycosynthétiques potentiels. Dans ce cadre, l’α-L-arabinofuranosidase de Thermobacillus xylanilyticus (TxAbf) de la famille GH51 a été étudiée et modifiée pour créer des transfuranosylases efficaces. Ici, poursuivant nos études de TxAbf, quatre aspects sont abordés : (i) Une étude structure-fonction porte sur deux déterminants du sous-sites -1. Cette étude révèle que le résidu L352 intervient dans les deux sous-sites -1 et +1, tandis que l’action de F26 reste limitée au sous-site -1. De plus, le triple mutant R69H-N214W-L352M provoque un effet domino, augmentant la flexibilité locale, créant ainsi de nouvelles interactions avec les molécules acceptrices. (ii) L’étude de l’autocondensation a permis d’augmenter les rendements globaux en homo-oligofuranosides. Fait significatif, la substitution N216W dans TxAbf génère un sous-site de liaison supplémentaire et une modification de regiosélectivité. (iii) Concernant la synthèse de D-galactofuranosides, le mutant R69H-N216W s’avère être un outil de choix. Toutefois, sa regiosélectivité vers des liens (1,3) peut être augmenté par l’introduction d’autres mutations. La synthèse de D-Galf-(1,3)-α-D-Glcp et de ß-D-Galf-(1,n)-α-D-GlcpNAc sont également décrites. (iv) Travaillant avec d’autres équipes de recherche, il a été possible de démontrer l’utilité et la généricité d’une stratégie d’ingénierie des protéines simple permettant de rapidement concevoir de puissantes transglycosylases, à partir de glycoside hydrolases agissant par rétention.