Analyse protéomique des interactions de la protéine C du virus de la rougeole avec l'hôte dans un contexte infectieux

Proteomic Analysis of Measles Virus Protein C-Host Interactions in an Infectious Context

• Auteur / Autrice : Alice Meignie
• Direction : Frédéric Tangy, Anastassia V. Komarova
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie. Infectiologie
• Date : Soutenance le 10/10/2019
• Etablissement(s) : Université Paris Cité
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Bio Sorbonne Paris Cité (Paris ; 2014-....)
• Jury : Président / Présidente : Pierre-Emmanuel Ceccaldi
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Frédéric Tangy, Anastassia V. Komarova, Pierre-Emmanuel Ceccaldi, Pierre-Olivier Vidalain, Catherine Pellat-Deceunynck, Damien Vitour
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Pierre-Olivier Vidalain, Catherine Pellat-Deceunynck

Mots clés

Mots clés contrôlés

Virus oncolytiques

Résistance aux maladies

Interactions protéine-protéine

Virulence (microbiologie)

Virus de la rougeole

Mots clés libres

Interactome

Résumé

Les virus manipulent la machinerie centrale de l’hôte à leur avantage. Afin de créer un environnement favorable pour leur survie et propagation ils bloquent les réponses antivirales de la cellule hôte. Le virus de la rougeole (MV) possède deux protéines non-structurales MV-V et MV-C, dont on a observé qu’elles jouent un rôle dans ce contournement la réponse interféron de l’hôte et la régulation des voies de signalisation de mort cellulaire. Plusieurs mécanismes moléculaires expliquant la régulation de l’immunité et la mort cellulaire par MV-V ont été proposés, alors que ceux de la protéine MV-C restent encore peu étudiés. On pense que certains facteurs cellulaires contrôlés par MV-C lors de la réplication virale font partie des voies de signalisation d’immunité innée et de mort cellulaire. Dans le but d’identifier ces facteurs ciblés par le virus, nous avons purifié les protéines cellulaires qui interagissent directement ou indirectement avec MV-C. Nous avons utilisé des virus recombinants exprimant certaines protéines virales tagguées et une méthode de purification par affinité couplée à l’identification par spectrométrie de masse. Nous avons pu en extraire une liste de protéines interagissant spécifiquement avec MV-C dans différentes lignées cellulaires. Nous avons ensuite sélectionné certaines protéines appartenant aux voies de signalisation d’immunité innée et de mort cellulaire. Pour tester leur interaction directe avec MV-C, des méthodes de complémentation protéique (PCA) et de transfert d'énergie de résonance de bioluminescence (BRET) ont été utilisées. Ainsi, nous avons mis en évidence l’interaction directe de la protéine C avec les protéines iASPP, p65 et p53 qui contrôlent à la fois les voies de mort cellulaire et d’immunité innée.

Viruses manipulate central machineries of host cells to their advantage. They prevent host cell antiviral responses in order to create a favorable environment for their survival and propagation. Measles virus (MV) encodes two non-structural proteins MV-V and MV-C, proposed to counteract the host interferon response and to regulate cell death pathways in various functional assays. Several molecular mechanisms underlining MV-V regulation of innate immunity and cell death responses have been proposed, whereas MV-C host protein partners are less studied. We suggest that some cellular factors that are controlled by MV-C protein during viral replication could be components of innate immunity and the cell death pathways. In order to determine which host factors are targeted by MV-C, we captured both direct and indirect host protein partners of MV-C protein. For this we used a strategy based on recombinant viruses expressing tagged viral proteins followed by affinity purification and a bottom-up mass spectrometry analysis. A list of host proteins specifically interacting with MV-C protein in different cell lines was identified. Then we have selected proteins that belong to immunity and cell death biological pathways. Direct protein partners of MV-C were determined by applying protein complementation assay (PCA) and the bioluminescence resonance energy transfer (BRET) approach. As a result, we found that MV-C protein specifically interacts p65/iASPP/p53 protein complex that controls both death and innate immunity pathways.