Origine et spécificité de la réponse autoimmune au cours de la thrombopénie immunologique de l'adulte

Origin and specificity of autoimmune response in adult immune thrombocytopenia

• Auteur / Autrice : Étienne Crickx
• Direction : Claude-Agnès Reynaud
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance le 06/12/2019
• Etablissement(s) : Université Paris Cité
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale BioScience Paris Cité (Paris ; 2014-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Institut Necker Enfants-Malades (Paris ; 2014-....)
• Jury : Président / Présidente : Xavier Mariette
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Xavier Mariette, Thierry Defrance, Thierry Fest, Frédéric Rieux-Laucat, Marion Espéli, Matthieu Mahevas
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Thierry Defrance, Thierry Fest

Mots clés

Mots clés contrôlés

Maladies autoimmunes

Thrombocytopénie

Mots clés libres

Lymphocyte B

Thrombopénie immunologique

Rituximab

B cells

Immune thrombocytopenia

Rituximab

Résumé

La thrombopénie immunologique de l'adulte (PTI) est une maladie autoimmune principalement médiée par des anticorps dirigés contre les glycoprotéines plaquettaires, dont la GPIIbIIIa. Le rituximab, anticorps monoclonal chimérique anti-CD20, permet d'obtenir près de 60% de réponse à court terme, mais la plupart des patients rechutent lors de la reconstitution lymphocytaire B. L'accès aux tissus spléniques de ces patients au moment précis de la rechute permet d'étudier la mise en place d'une nouvelle réponse auto-immune. L'objectif de ce travail était de préciser si les cellules ayant initié la rechute étaient des lymphocytes B nouvellement générés par la moelle osseuse, ou bien des lymphocytes B mémoires autoréactifs ayant résisté au rituximab. Pour répondre à cette question, nous avons utilisé une double approche combinant l'identification de lymphocytes B anti-GPIIbIIIa en cellule unique à partir des tissus spléniques de 8 patients ayant répondu au rituximab puis rechuté 8 à 14 mois plus tard, avec le séquençage haut débit des gènes des chaines lourdes d'immunoglobulines des différentes sous populations B spléniques pour 3 d'entre eux. Nos résultats suggèrent que des lymphocytes B mémoires spléniques ayant résisté au rituximab peuvent retourner dans les centres germinatifs et/ou générer des plasmocytes autoréactifs, contribuant ainsi aux rechutes à distance du traitement. Nous avons par la suite confirmé la présence de lymphocytes B mémoires résistants au rituximab dans une autre cohorte de 16 patients splénectomisés entre 1 et 6 mois après le rituximab. La majorité des patients avaient des lymphocytes B mémoires résiduels détectables, présentant un phénotype atypique et une expression réduite de l'immunoglobuline de surface. Ces cellules ne répondaient pas à la stimulation par le BCR, pouvant expliquer leur relative quiescence dans les mois suivant le rituximab. Nos données permettent de mieux comprendre les rechutes après rituximab et d'envisager de nouvelles stratégies thérapeutiques pour améliorer les rémissions à long terme, dans le PTI mais aussi dans d'autres pathologies autoimmunes médiées par les anticorps où le rituximab est transitoirement efficace.

Immune thrombocytopenia (ITP) is an autoimmune disease mediated by pathogenic antibodies directed against platelet antigens, mainly GPIIbIIIa. Almost 60% of adult patients achieve a short-term response after rituximab, but most of them relapse during B cell reconstitution. Therapeutic splenectomy performed in this context allows for the study of a new immune response during relapse. The main goal of this work was to understand if the relapse was initiated by newly generated B cells, or autoreactive, rituximab-resistant memory B cells. To answer this question, we performed single cell identification of anti-GPIIbIIIa specific B cells from the spleen tissues of 8 patients that responded to rituximab and relapsed 8 to 14 months later, combined to next-generation sequencing of heavy chain immunoglobulin genes in several B cells subsets of 3 of these patients. Our results suggest that splenic rituximab-resistant memory B cells can return in germinal centers and/or generate autoreactive plasma cells, thus contributing to disease relapses after initial response to rituximab. Next, we confirmed the presence of rituximab-resistant memory B cells in another cohort of 16 patients that underwent splenectomy 1 to 6 months after rituximab. Most patients had residual memory B cells with atypical phenotype including reduced expression of surface immunoglobulin. These cells did not activate in response to BCR ligation, thus explaining their relative quiescence in the months following rituximab. In conclusion, our data shed light on the mechanisms underlying relapses after initial response to rituximab. They pave the way for new therapeutic strategies to improve remission duration in ITP and in other autoimmune diseases where rituximab is transiently efficient.