Développement et caractérisation d'outils immunologiques dirigés contre des récepteurs membranaires d'intérêt thérapeutique

Development and characterization of immunological tools directed against membrane proteins of therapeutic interest

• Auteur / Autrice : Lucie Hartmann
• Direction : Renaud Wagner
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biotechnologies
• Date : Soutenance le 16/05/2019
• Etablissement(s) : Strasbourg
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Biotechnologie et signalisation cellulaire (Strasbourg)
• Jury : Président / Présidente : Christophe Ritzenthaler
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Renaud Wagner, Christophe Ritzenthaler, Julie Kniazeff, Bruno Miroux
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Julie Kniazeff, Bruno Miroux

Mots clés

Mots clés contrôlés

Anticorps à domaine unique

Anticorps monoclonaux

Récepteurs couplés aux protéines G

Virus de la forêt de Semliki

Mots clés libres

RCPG

Récepteur de l’adénosine A2A

Récepteur de la mélatonine MT1

Nanodisques

Particules virales

SFV

Anticorps

Sérum polyclonal

Nanobodies

GPCRs

Adenosine A2A receptor

Melatonine MT1 receptor

Nanodiscs

Viral particles

SFV

Antibodies

Polyclonal serum

Nanobodies

Résumé

Les Récepteurs Couplés aux Protéines G (RCPG) constituent la plus grande famille de protéines membranaires chez l’Homme, et leur implication dans un grand nombre de processus physiologiques justifie pleinement l’intérêt de leur étude. Les anticorps spécifiques de ces récepteurs sont des outils polyvalents à haute valeur ajoutée, qui restent toutefois encore trop rarement disponibles, notamment en raison des difficultés techniques posées par leur génération. Ce manuscrit présente la mise au point d’une méthode d’immunisation alternative et innovante, mettant en jeu des particules virales recombinantes dérivées du Virus de la Forêt de Semliki (SFV) codant pour le récepteur d’intérêt. Appliquée au récepteur de l’adénosine A2A humain, l’immunisation permet d’engendrer la surexpression de celui-ci à la surface des cellules de l’animal infecté, et de provoquer l’apparition d’une réponse immunitaire. Cette approche permet d’une part de générer un sérum polyclonal de souris spécifique au récepteur, et ouvre donc une nouvelle voie pour l’obtention d’anticorps monoclonaux murins. Elle semble d’autre part prometteuse pour la génération de nanobodies.

G Protein Coupled Receptors (GPCRs) constitute the largest membrane protein family represented in the human genome. Their involvement in a wide number of biological processes fully supports their study. GPCR-targeting antibodies are versatile and valuable tools, which remain scarcely available, chiefly because their generation is a challenging process. This thesis presents an alternative and innovative strategy in which recombinant Semliki Forest Virus (SFV) particles coding for the receptor of interest are used as immunogens. When applied to the human version of the Adenosine A2A receptor, this method enables to cause the receptor’s overexpression at the surface of the infected animal cells, which generates an immune response. This strategy enables to raise receptor-specific mouse polyclonal serum. It opens a new path towards the generation of monoclonal mouse antibodies. Additionally, it seems to also be a promising approach to develop nanobodies.