Thèse soutenue

Intérêt de la lyophilisation pour améliorer la stabilité des microémulsions chargées en Amphotéricine B destinées au traitement de la leishmaniose
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Auteur / Autrice : Andreza Do Vale Morais
Direction : Gillian Barratt
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Pharmacotechnie et biopharmacie
Date : Soutenance le 20/10/2017
Etablissement(s) : Université Paris-Saclay (ComUE) en cotutelle avec Universidade federal do Rio Grande do Norte (Natal, Brésil)
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Innovation thérapeutique : du fondamental à l'appliqué (Châtenay-Malabry, Hauts-de-Seine ; 2015-....)
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Institut Galien Paris-Saclay (Châtenay-Malabry, Hauts-de-Seine ; 1998-....)
établissement opérateur d'inscription : Université Paris-Sud (1970-2019)
Jury : Président / Présidente : Hatem Fessi
Examinateurs / Examinatrices : Gillian Barratt, Hatem Fessi, Frédéric Jean Georges Frezard, Philippe Legrand, Eryvaldo Socrates Rabosa do Egito, Philippe Loiseau
Rapporteurs / Rapporteuses : Frédéric Jean Georges Frezard, Philippe Legrand

Mots clés

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Résumé

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La leishmaniose viscérale est une maladie tropicale négligée et létale en l’absence de traitement. L’Amphotéricine B (AmB) est une molécule efficace mais sa forme conventionnelle, Fungizone®, conduit à une toxicité limitant les doses tandis que les formulations lipidiques moins toxiques telles que l’Ambisome® sont très coûteuses. Ainsi, le besoin de nouvelles formes thérapeutiques à la fois non toxiques et peu coûteuses subsiste actuellement. Dans ce travail, nous avons étudié deux solutions possibles : la Fungizone® chauffée (H-AmB) et une microémulsion chargée en AmB (MEAmB). En ce qui concerne la microémulsion, une forme lyophilisée est souhaitable afin de s’affranchir des risques d’hydrolyse et de contamination microbienne. Les objectifs de la thèse étaient de développer les deux nouvelles formes, d’évaluer la toxicité et l’efficacité de H-AmB et MEAmB contre Leishmania donovani (souche LV9) in-vitro et in-vivo et également d’optimiser la lyophilisation de la microémulsion.La microémulsion MEAmB est composée de gouttelettes sphériques dont le diamètre moyen est proche de 35 nm et a montré un comportement rhéologique de type newtonien. L’analyse spectroscopique de H-AmB a révélé la formation de super-agrégats qui sont moins toxiques que d’autres états d’agrégation. La MeAmB ainsi que l’H-AmB ont montré une activité antiparasitaire équivalente à celle d’AmBisome® sur les formes axénique et intramacrophagique de L. donovani. L’indice de sélectivité pour ces deux formulations est élevé, en contraste avec celui de la Fungizone® native. De plus, à la différence d’AmBisome®, elles ont montré une activité importante sur des souches résistantes à l’AmB. L’activité anti-leishmanienne in-vivo des nouvelles formulations est comparable aux formulations de référence. De même, aucune différence significative des marqueurs de toxicité rénale et hépatique n’a pu être observée. Ainsi, l’H-AmB et la MEAmB pourraient être considérées comme des traitements alternatifs de la leishmaniose viscérale, avec l’avantage d’être moins onéreuses à produire que l’Ambisome®.Afin d’optimiser le procédé de lyophilisation de la MEAmB, un plan d’expérience a été mis en œuvre. Ainsi, la taille des gouttelettes est minimisée par l’utilisation de 5% de maltose comme cryoprotectant, avec une température de congélation de -80°C et un temps total de lyophilisation de 24h. Par ailleurs, aucune modification significative de la teneur en AmB n’a été observée après la lyophilisation. Ainsi, la MEAmB lyophilisée est stable et pourrait éviter la dégradation due à la présence d’eau.