Apports de la protéomique quantitative différentielle haut-débit à l'étude des mécanismes de modification du cytosquelette de cellules tubulaires proximales induits par les Inhibiteurs de la Calcineurine

Contributions of the differential high-throughput quantitative proteomic analysis of tubular proximal cells to the study of Calcineurin Inhibitors-induced modifications of the Actin cytoskeleton

• Auteur / Autrice : Bastien Burat
• Direction : Marie Essig
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Pharmacologie et science du médicament
• Date : Soutenance le 19/12/2017
• Etablissement(s) : Limoges
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale biologie-santé - Bio-santé (Limoges ; 2009-2018)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Pharmacologie des Immunosuppresseurs et de la Transplantation
• Jury : Président / Présidente : Nicolas Pallet
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Chantal Barin-Le Guellec
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Joost-Peter Schanstra, Laurent Juillard

Mots clés

Mots clés contrôlés

Actine

Cytosquelette

Protéomique

Inhibiteurs de la calcineurine

Tacrolimus

Ciclosporine

Mots clés libres

Cellules tubulaires proximales

ITRAQ

CiR-C

Cofiline

Tubular proximal cells

ITRAQ

CiR-C

Cofilin

Résumé

En transplantation d’organe solide, les Inhibiteurs de la Calcineurine (ICN), Cyclosporine A et Tacrolimus, ont permis un amélioration significative de la survie à court terme du greffon en prévenant le rejet d’allogreffe. Cette évolution positive est contrebalancée par une néphrotoxicité susceptible de contribuer au développement complexe et multifactoriel de la dysfonction chronique du greffon, facteur pronostique majeur d’une insuffisance rénale terminale. L’objectif principal de ce travail a été de combiner deux approches expérimentales complémentaires, afin de mettre en lumière des aspects inédits de la physiopathologie des ICN. La première approche repose sur l’application de la technique de protéomique quantitative« shotgun » iTRAQ (« isobaric Tags for Relative & Absolute Quantitation ») à l’analyse non ciblée du protéome de cellules tubulaires proximales. La seconde approche applique de manière ciblée les outils classiques de biologie moléculaire à l’étude du cytosquelette d’Actine de cellules tubulaires proximales. La combinaison de ces deux stratégies complémentaires a permis de mettre en lumière un rôle inédit du cytosquelette d’Actine dans les effets physiopathologiques de la Cyclosporine A en apportant des éléments en faveur d’un mécanisme reposant sur une régulation originale de la dynamique intracellulaire de l’Actine.

In solid organ transplantation, Calcineurin Inhibitors, Cyclosporin A and Tacrolimus, prevent allograft rejection and ensure short-term allograft survival. However, CNI elicit nephrotoxic side effects whose mechanisms remain widely unsolved and are thought to participate to the multifactorial development of chronic kidney disease, leading to renal failure. The aim of thiswork was to combine targeted and untargeted experimental strategies to better understand CNI-induced physiopathological mechanisms.The first approach was based on the untargeted monitoring of the proximal tubular proteome by the quantitative shotgun proteomic technique, iTRAQ (« isobaric Tags for Relative & Absolute Quantitation »). The second approach consisted in the study of the Actin cytoskeleton of proximal tubular cells by classical molecular biology techniques. In the light of results from both approaches, this work reported that the Actin cytoskeleton of proximal tubular cells may play a part in the pathophysiology of CsA thanks to a mechanism based on an original regulation of the intracellular dynamics of Actin.