Recherche Avancée

Thèse soutenue

Analyse par LC-MS/MS des transporteurs membranaires présents à la barrière hémato-encéphalique : intérêts en neuropsychopharmacologie

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Auteur / Autrice : David Gómez Zepeda
Direction : Marie-Claude Menet
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Chimie analytique
Date : Soutenance le 25/11/2016
Etablissement(s) : Sorbonne Paris Cité
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Médicament, toxicologie, chimie, imageries (Paris ; 2014-....)
Partenaire(s) de recherche : établissement de préparation : Université Paris Descartes (1970-2019)
Laboratoire : Optimisation thérapeutique en neuropsychopharmacologie (Paris ; 2014-....)
Jury : Président / Présidente : Patrice Prognon
Examinateurs / Examinatrices : Patrice Prognon, Fathi Moussa, Caroline Tokarski, Xavier Declèves, Nicolas Tournier, Philippe Sergent
Rapporteur / Rapporteuse : Fathi Moussa, Caroline Tokarski

Résumé

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Les transporteurs ABC (ATP-binding cassette) localisés à la barrière hématoencéphalique (BHE) protègent le cerveau de xénobiotiques toxiques, mais ils peuvent aussi empêcher l'entrée de molécules d'intérêt thérapeutique. L'objectif principal de ces travaux était de développer et de valider une méthode de quantification ciblée par LC-MS/MS pour la quantification absolue de transporteurs ABC. Cette méthode a ensuite été appliquée à l'analyse d'échantillons d'intérêt pharmacologique. La mise au point de la méthode s'est focalisée dans un premier temps sur le développement d'une protéine membranaire permettant le contrôle des différentes étapes du traitement d'échantillon puisque le rendement de récupération de cette protéine est similaire à celui des transporteurs ABC. Dans un second temps, l'analyse des micro-vaisseaux cérébraux a mis en évidence l'intérêt de normaliser les résultats en utilisant un marqueur des cellules endothéliales pour la quantification des transporteurs ABC afin de tenir compte de l'enrichissement plus ou moins important en cellules endothéliales des échantillons. La méthode a été ensuite appliquée à la validation d'un modèle de souris humanisée ainsi qu'à l'étude de l'expression différentielle de P-gp, BCRP et MRP1 à 5 dans des micro-vaisseaux d'échantillons de gliome humain, des cellules endothéliales mises en culture et la lignée cellulaire humaine hCMEC/D3.