La SUMOylation du kinétochore et ses effets sur la ségrégation chromosomique
Auteur / Autrice : | Joseph Bareille |
Direction : | Nicolas Leulliot |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biochimie |
Date : | Soutenance le 28/11/2016 |
Etablissement(s) : | Sorbonne Paris Cité |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Médicament, toxicologie, chimie, imageries (Paris ; 2014-....) |
Partenaire(s) de recherche : | établissement de préparation : Université Paris Descartes (1970-2019) |
Laboratoire : Laboratoire de cristallographie et RMN biologiques / LCRB - UMR 8015 | |
Jury : | Président / Présidente : Jean-Pierre Quivy |
Examinateurs / Examinatrices : Jean-Pierre Quivy, Katja Wassmann, Julien Dumont | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Jean-Pierre Quivy, Katja Wassmann |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Mots clés libres
Résumé
Certaines protéines du kinétochore, l'interface protéique entre les microtubules et les centromères, ont été identifiées comme étant régulées par SUMO, une protéine de type ubiquitine. Dans des lignées cellulaires humaines, la déplétion de SENP6, une isopeptidase clivant les chaînes poly-SUMO, entraîne la dégradation protéasomale de CENP-I au moyen de ligases-ubiquitine dépendantes de SUMO. Cependant, les mécanismes liant la régulation du kinétochore et la SUMOylation restent largement méconnus. Mon travail doctoral est orienté vers l'utilisation d'essais biochimiques afin d'identifier les lysines impliquées dans la SUMOylation de CENP-I et de reconstituer des kinétochores in vitro et 3) d'étudier l'impact de la SUMOylation sur cette structure. Les produits de la SUMOylation in vitro de CENP-I ont été analysés par spectrométrie de masse afin d'identifier les lysines associées. J'ai aussi reconstitué des kinétochores in vitro en suivant un protocole publié. Cependant, ces kinétochores sont trop instables pour être utilisés dans des essais biochimiques. Pour pallier ces limitations, j'ai adapté une autre approche en fusionnant CENP-T au système LacI. Si ce système m'a permis de recruter certaines des protéines du kinétochore, il génère des contraintes nécessitant de plus amples optimisations pour être utilisé lors d'études biochimiques.