Rôle des miARN dans la régulation des fonctions plaquettaires

Role of miRNA in the regulation of platelet function

• Auteur / Autrice : Elise Dreano
• Direction : Christilla Bachelot-Loza
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire
• Date : Soutenance le 25/11/2016
• Etablissement(s) : Sorbonne Paris Cité
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Médicament, toxicologie, chimie, imageries (Paris ; 2014-....)
• Partenaire(s) de recherche : établissement de préparation : Université Paris Descartes (1970-2019)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Innovations Thérapeutiques en hÉMostase (Paris ; 2006-....)
• Jury : Président / Présidente : Pascale Gaussem
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Pascale Gaussem, Marie-Christine Alessi, Pierre Fontana, Stéphane Germain
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Marie-Christine Alessi, Pierre Fontana

Mots clés

Mots clés contrôlés

Mégacaryocytes

MicroARN

Hémostase

Plaquettes sanguines

Mots clés libres

Plaquettes

Hémostase

MiARN

Dicer

Réactivité plaquettaire

Mégacaryocytes

Platelets

Hemostasis

MiRNA

Dicer

Platelet reactivity

Megakaryocyte

Résumé

Les miARN sont de petits ARN non codants d'environ 22 nucléotides dont le rôle principal est la régulation négative de l'expression génique. Grâce à la reconnaissance de sites de liaison spécifique, généralement situés dans la région non traduite 3' UTR (« untranslated region ») des ARNm, les miARN incorporés dans le complexe RISC (« RNA induced silencing complex ») vont permettre la dégradation de ces ARNm ou la répression de leur traduction. Depuis quelques années, l'importance des miARN mégacaryocytaires et plaquettaires a été mis en évidence dans diverses études. Plusieurs miARN présents dans les mégacaryocytes jouent un rôle dans les différentes étapes de la mégacaryopoïèse. Bien que les plaquettes soient anucléées, elles contiennent également des miARN ainsi que l'enzyme Dicer, essentielle pour la maturation des miARN. Quelques études récentes ont suggéré que les miARN moduleraient les fonctions plaquettaires. Certains miARN et leur ARNm cible tels que miR-96/ARNm de VAMP8 ou encore miR-223/ARNm de P2Y12, ont d'ailleurs été associés à la réactivité plaquettaire. L'objectif de ce projet était d'étudier l'effet de l'invalidation du gène Dicer sur les fonctions plaquettaires en utilisant un modèle de souris invalidées pour l'enzyme DICER spécifiquement dans les mégacaryocytes matures (dicerfl :fl :PF4-Cre). Nous avons montré que l'invalidation partielle de Dicer observée dans notre modèle n'affecte pas la production plaquettaire. En revanche, elle conduit à une augmentation de la réactivité plaquettaire au PAR4-ap et au collagène (et non à l'ADP). Cet effet sur les plaquettes est également associé à une modulation de l'expression d'une partie des miARN plaquettaires. L'hyperréactivité des plaquettes déficientes en Dicer, stimulées par le PAR4-ap ou le collagène, n'est pas due à une modification de l'expression des récepteurs à la surface des plaquettes. Ainsi, nous avons proposé que la modulation de l'expression des miARN affecte l'expression des protéines impliquées dans les voies de signalisation des voies du PAR4 et des récepteurs au collagène.

MiRNAs are small non-coding RNAs of approximately 22 nucleotides that negatively regulate gene expression. Indeed, with the recognition of specific binding sites, generally located in the 3' untranslated region (UTR) of mRNAs, miRNAs incorporated into the RISC (RNA induced silencing complex) allow to either the degradation or the repression of their target mRNAs translation. MiRNAs are found in megakaryocytes and platelets and have been the subject of recent studies. Several miRNAs present in megakaryocytes play a role at various stages of megakaryopoiesis. Despite being anucleated, platelets also contain miRNAs and Dicer, an enzyme essential for the miRNA maturation. Recent studies have also suggested that miRNAs could regulate platelet functions. Some miRNAs and their target mRNAs, as miR-96/VAMP8 mRNA or miR-223/P2Y12 mRNA coding P2Y12, have also been associated with platelet reactivity. The aim of this project was to study the effect of the invalidation of Dicer gene on platelet functions, using a mouse model of genomic deletion of Dicer, specifically in mature MKs and platelets (dicerfl :fl :PF4-Cre). We have shown that the partial invalidation of Dicer did not affect platelets production. However, it led to an increase platelet reactivity in response to PAR4 and collagen, but not to ADP. This effect on platelets was also associated with a modulation of the expression of some platelet miRNAs. Hyperreactivity of Dicer-deficient platelets in response to PAR4 or collagen was not due to an up-regulation of the density receptor on the platelet membrane. Therefore, we suggest that modulation of the expression of miRNAs affected proteins involved in signaling pathways of PAR4 and collagen receptors.