Production, traçage en temps réel de domaines de la fibronectine humaine recombinante et immobilisation des recombinants sur des surfaces bioactives : modèles ou à visées thérapeutiques
Auteur / Autrice : | Cyrine Dridi |
Direction : | Didier Lutomski, Abdellatif Elm'Selmi |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Chimie mention Génie Biologique et Médical |
Date : | Soutenance le 09/03/2015 |
Etablissement(s) : | Sorbonne Paris Cité |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Galilée (Villetaneuse, Seine-Saint-Denis) |
Partenaire(s) de recherche : | établissement de préparation : Université Sorbonne Paris Nord (Bobigny, Villetaneuse, Seine-Saint-Denis ; 1970-....) |
Laboratoire : Laboratoire Chimie bioorganique, biophysique et biomatériaux pour la santé (Villetaneuse, Seine-Saint-Denis) | |
Jury : | Président / Présidente : Dominique Ledoux |
Examinateurs / Examinatrices : Florence Dufour, Karine Blondeau | |
Rapporteurs / Rapporteuses : Catherine Boisson-Vidal, Jean-François Renaud de la Faverie |
Mots clés
Résumé
Dans ce travail de thèse, nous avons développé un nouveau procédé de production et de purification en temps réel des domaines 9 et 10 de la fibronectine humaine chez E.coli. Cette stratégie combine trois partenaires de fusion en tandem : un double tag d’affinité (10xHis et SBP) et un tag de coloration (le domaine de fixation de l’hème du cytochrome b5) en présence d’un site Tev. Ce système a montré sa performance dans le traçage visuel des étapes d’expression et de purification et dans la quantification de la CMAT-FNIII9-10. La présence du double tag d’affinité permet une étape de purification simple et offre un degré de pureté atteignant les 98%. Par ailleurs, le cytochrome b5 a montré son intérêt dans le suivi visuel et quantitatif de l’adsorption de la CMAT-FNIII9-10 à la surface d’un support plastique. Ensuite, l’activité du fragment recombinant a été validée avec succès. Dans cette étude, nous avons construit une matrice adhésive en combinant les propriétés du polymère PCL avec celles de la CMAT-FNIII9-10. L’immobilisation de celle-ci s’est opérée d’une manière orientée en adsorbant la protéine de fusion à la surface des PCL par l’intermédiaire de la streptavidine. Cette approche a conduit à l’élaboration d’un matériau biofonctionnalisé en optimisant l’exposition des sites d’attachement cellulaire à la surface des PCL par une immobilisation orientée. La réponse cellulaire des CMS humaines a été validée efficacement sur cette matrice, en absence de sérum et en présence de BSA. Les résultats de cette expérience montrent que cette stratégie a contribué à améliorer l’exposition des sites « RGD » et « PHSRN » favorisant l’interaction avec les récepteurs cellulaires.