Caractérisation moléculaire des interactions HCMV/cellules dendritiques : impact des glycosylations de l'enveloppe virale sur le tropisme

Characterization of molecular interactions between HCMV and dendritic cells : impact of glycosylations on viral tropism

• Auteur / Autrice : Coraline Chéneau
• Direction : Franck Halary
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie. Immunologie-virologie
• Date : Soutenance en 2015
• Etablissement(s) : Nantes
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Biologie-Santé Nantes-Angers (2008-2021)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre de Recherche en Transplantation et Immunologie
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Nantes Université. Pôle SantéUFR Médecine et Techniques Médicales (Nantes) - Université Nantes-Angers-Le Mans - COMUE (2009-2015)
• Jury : Président / Présidente : Julie Dechanet-Merville
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Sébastien Gouin
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Franck Fieschi, Yann Guérardel

Mots clés

Mots clés contrôlés

Glycosylation

Anticorps

Tropisme

Glycoprotéines

Cytomégalovirus humain

Cellules dendritiques

Résumé

Les cellules dendritiques (DC) perçoivent et alertent de l'intrusion dans l'organisme d'agents pathogènes tels que des virus. Un type de récepteurs exprimés chez les DC myéloïdes, les lectines membranaires, peuvent reconnaître des virus. Nous avons montré antérieurement que le domaine lectine ou CRD (Carbohydrate Recognition Domain) de DC-SIGN interagissait avec une glycoprotéine d'enveloppe du cytomégalovirus humain (HCMV), la glycoprotéine B (gB) (Halary, 2002). Ce travail de thèse a participé à une meilleure caractérisation de l'interaction entre DC-SIGN et la gB. Pour cela nous avons utilisé des mutants de DC-SIGN, de la gB ainsi que des anticorps dirigés contre ces deux protéines. Nous avons aussi analysé les sucres à la surface de la gB et leur importance dans l'interaction avec DC-SIGN. De plus, nous nous sommes intéressés au tropisme du CMV. Les souches de HCMV amplifiées au laboratoire présentent un tropisme directement dépendant du type de cellule ayant servi à générer le stock viral (Towler, 2012). Le tropisme différentiel du CMV pour les cellules endothéliales ou des leukocytes du lignage myéloïde a été récemment imputé à un groupe de gènes viraux, UL128-UL131A. Néanmoins ces gènes n'expliquent pas tout (Lauron, 2014). Nous avons fait l'hypothèse que le tropisme du CMV pourrait être en partie dû à des différences de glycosylations (Nyström, 2007/2009). Pour explorer cette hypothèse, nous avons utilisé deux stocks de CMV produits sur fibroblastes ou sur cellules endothéliales et nous avons analysé les sucres de leur enveloppe, leur infectiosité et les voies de glycosylation impliquées lors de l'infection.

Dendritic cells (DC) sense and alert the host after pathogenic virus intrusions. We have shown previously that the lectin domain of DC-SIGN could interact with the human cytomegalovirus (HCMV) envelope glycoprotein B (Halary, 2002). However, how these two molecules interact is not well defined. Therefore I've undertaken this characterization as a first goal of my thesis in order to establish whether or not the DC-SIGN/HCMV gB complex is basically a suitable target for further new therapeutic developments. To this aim, DC-SIGN and gB mutants as well as anti-DC-SIGN or -gB antibodies were used to delineate the interaction zone between both interactants. A second aim of my thesis work was to answer the question “are HCMV envelope glycosylated proteins involved in tropism alterations?”. Briefly, it has been shown previously that laboratory strains tropism may be dependent on the producing cell type from which they were originating (Towler, 2012). This differential tropism of HCMV for endothelial cells and leukocytes was recently found to correlate with the presence of the UL128L locus in the viral genome. However, this locus cannot explain on its own the former observations. So we proposed that the HCMV tropism could be in part due to differential glycosylation profiles on HCMV particles. To start solving this question, I differentially analyzed glycoprofiles on two HCMV stocks respectively produced on fibroblasts and on an endothelial cell line via a home-made lectin-based interaction assay. Then I analyzed also their respective infectiousness and how glycosylation pathways might be altered at a basal state for each cell type and also in the course of infection