Étude de la non détectabilité de la souche de Legionella pneumophila Sequence Type 47 pulsotype Lorraine dans l’environnement

Analysis of non detectability of the L. pneumophila Sequence Type 47 pulsotype Lorraine strain in environment

• Auteur / Autrice : Pierre Cassier
• Direction : Jérôme Étienne
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie de l'environnement
• Date : Soutenance le 17/12/2015
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Evolution Ecosystèmes Microbiologie Modélisation (Lyon ; 1999-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre international de recherche en infectiologie (Lyon ; 2013-....)
• Jury : Président / Présidente : Philippe Vanhems
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Didier Che
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Carmen Buchrieser, Valeria Gaia, Sophie Jarraud

Mots clés

Mots clés contrôlés

Cellules souches

Maladie des légionnaires

Legionella pneumophila

Mots clés libres

Legionella pneumophila

ST47

Souche Lorraine

PCR

Non détectabilité

Environnement

Sources

Legionella pneumophila

ST47

Lorraine strain

LD

Non-detectability

Environment

Strains

Résumé

Les souches de Legionella pneumophila sérogroupe 1 ST47 Lorraine sont actuellement responsables d'un nombre croissant de cas de légionelloses particulièrement dans le Nord de l'Europe. Cependant, elles ne sont retrouvées que très rarement dans l'environnement quand des investigations sont menées pour rechercher la source de cas de légionellose. Son environnement naturel reste donc méconnu. Notre objectif était donc d'étudier le phénomène de non détectabilité de la souche ST47 dans l'environnement. Nous avons observé que les traitements pré-analytiques (acidification, chauffage) pouvaient interférer avec les paramètres de culture pour certaines souches Lorraine environnementales, et que le milieu GVPC utilisé dans la norme NF T90-431 n'était pas recommandé pour la recherche des légionelles dans les prélèvements respiratoires, et donc potentiellement dans les prélèvements environnementaux. Ainsi, la PCR spécifique ST47, développée en collaboration avec l'équipe de Tim Harrison (Londres, Royaume-Uni), peut constituer un outil de détection intéressant dans les différentes matrices environnementales pour identifier les réservoirs de la souche. Nous avons cherché à cibler ces réservoirs. Nous avons montré, d'une part, que les robinets pouvaient être des réservoirs potentiels de légionelles. D'autre part, les données clinicoépidémiologiques et géographiques des souches Lorraine ST47 ont montré que les cas survenaient essentiellement hors institution (hôpital, maison de retraite) et principalement dans le quart Nord-Est du pays. L'amélioration des connaissances clinico-épidémiologiques et l'utilisation de la PCR spécifique ST47 devraient permettre, en s'affranchissant ou en améliorant les paramètres culturaux, d'identifier les réservoirs environnementaux de cette souche

The recently identified strains of Legionella pneumophila serogroup 1 belonging to Sequence Type (ST) 47 and pulsotype Lorraine are now responsible for an increasing number of Legionnaires’ disease (LD) cases mainly in the North of Europe. The major paradox is that ST47 strains are extremely rarely detected in environmental samples when investigations to identify the source of ST47 associated LD cases are undertaken. Thus its environmental habitat is unknown. The aim of our work was to study the non-detectability of this strain in environmental samples. Firstly, we have observed that pre-treatments (heat, acid) could interfere with recovery of an environmental ST47 Lorraine strain, and secondly, that GVPC medium imposed by the French standard NF T90-431, was not recommended for detection of Legionella spp. In clinical samples and potentially in environmental samples. Thus, to detect and identify ST47 Lorraine strains from clinical and ultimately, environmental samples in order to find the potential source of infection, we developed a strain specific realtime PCR method, in collaboration with Tim Harrison’s team (London, United Kingdom). We have also sought to target these sources. Then, we have shown that L. pneumophila could be detected in aerosols of a tap water. Moreover, epidemiologic French data have demonstrated that most of the LD cases associated with ST 47 strains occurred mainly in North East and were mainly community-acquired. Improved epidemiologic knowledge and the use of the strain specific real-time PCR should enable identification of environmental sources of ST47 Lorraine strain without culturing