Sélection et caractérisation d'anticorps et de fragments d'anticorps pour l'immunociblage intracellulaire

Antibodies and antibody fragments selection and characterization for intracellular immunotargeting

• Auteur / Autrice : Guillaume Freund
• Direction : Etienne Weiss
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
• Date : Soutenance le 31/01/2014
• Etablissement(s) : Strasbourg
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Biotechnologie et signalisation cellulaire (Strasbourg ; 2011-....)
• Jury : Président / Présidente : Arnaud Poterszman
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Emmanuelle Guillot-Combe
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Véronique Witko-Sarsat, Stéphane Paul

Mots clés

Mots clés contrôlés

Génie génétique

Anticorps recombinés

Anticorps antitumoraux

Biotechnologie

Immunothérapie anticancéreuse

Mots clés libres

Anticorps

ScFv

Intracorps

PCNA

Gankyrin

Immunociblage intracellulaire

Maturation d’affinité

Imagerie de cellules vivantes

Antibody

ScFv

Intrabody

PCNA

Gankyrin

Intracellular immunotargeting

Affinity maturation

Live-cell imaging

Résumé

Les anticorps thérapeutiques sont des molécules de choix pour le traitement standard de nombreuses formes de cancers. Leur application est à ce jour restreinte au compartiment extracellulaire à cause de leur taille trop importante qui les empêche de traverser la membrane cellulaire. Comme la plupart des cibles thérapeutiques du cancer semblent être situées dans le milieu intracellulaire, ce serait un plus de pouvoir exploiter les propriétés des anticorps dans les cellules pour étudier et perturber l’activité de ces cibles. Néanmoins, l’utilisation des anticorps dans le milieu intracellulaire constitue un véritable challenge, notamment à cause de la membrane cellulaire et de l’environnement réducteur du cytoplasme. L’ensemble des travaux de thèse présentés dans ce manuscrit ont permis d’établir les bases de plusieurs stratégies innovantes d’immunociblage intracellulaire et de mettre en lumière l’importance des différentes étapes de validation d’anticorps ou de fragments dérivés utilisés comme anticorps intracellulaires. La vectorisation d’anticorps complets par électroporation, le développement d’un intracorps bispécifique original anti-PCNA et la mise au point d’une méthode de mutagenèse inspirée de l’hypermutation somatique constituent les principales avancées apportées par ce travail dans le domaine de la recherche technologique en immuno biotechnologie.

Therapeutic antibodies are interesting molecules used to treat numerous pathologies such as cancer. Because of their size, their application is currently limited to the extracellular space. Indeed, antibodies cannot cross the cell membrane. Almost all therapeutic targets in cancer seem to be located inside cells, it would be beneficial to take advantage of antibodies in cells in order to neutralize the activity of these targets. The use of antibodies inside the cells is a real challenge, because of the cell membrane and the reducing environment of the cytoplasm. Several strategies of intracellular immunotargeting are presented in this thesis.