Étude de la physiopathologie et du caractère inflammatoire de la Fièvre Méditerranéenne Familiale (FMF)

Study of physiopathology and inflammatory mechanism underlying familial Mediterranean fever (FMF)

• Auteur / Autrice : José-Noël Ibrahim
• Direction : Jean-Claude Lecron, Myrna Medlej-Hashim
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie, Médecine, Santé
• Date : Soutenance le 16/01/2014
• Etablissement(s) : Poitiers en cotutelle avec Université Libanaise
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale biologie-santé - Bio-santé (Limoges ; 2009-2018)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Laboratoire Inflammation, tissus épithéliaux et cytokines (Poitiers ; 2008-....)
• Partenaire(s) de recherche : faculte : Université de Poitiers. UFR de médecine et de pharmacie
• Jury : Président / Présidente : Zeinab Saad
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Jean-Claude Lecron, Myrna Medlej-Hashim, Bassam Badran, Isabelle Jéru, André Mégarbané
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Hans Yssel, Gérard Lefranc

Mots clés

Mots clés contrôlés

Stress oxydatif

Polymorphisme génétique

Cytokines

Maladie périodique

Mots clés libres

Fmf

Ex vivo

Cytokines

Rac1

IL-1β

Stress oxydant

Polymorphismes

Pbmc

Pmn

Fmf

Ex vivo

Cytokines

Rac1

IL-1β

Oxidative stress

Polymorphisms

Pbmc

Pmn

Résumé

Afin de mieux comprendre le mécanisme physiopathologique et inflammatoire impliqué dans la fièvre Méditerranéenne familiale (FMF), nous avons étudié le profil cytokinique ex vivo monocytaire et lymphocytaire des patients FMF. Nous avons ensuite étudié l’implication potentielle dans la FMF de la protéine RAC1, qui semble jouer un rôle dans la production de l’IL-1β, d’une part, et dans la production du stress oxydant, d’autre part. Enfin, nous avons recherché une association potentielle entre les gènes IL-1β et IL-1RA et la susceptibilité et/ou la sévérité de la maladie.La première partie de l’étude a porté sur 34 patients FMF génétiquement confirmés, dont 9 ont été prélevés à deux reprises, en crise et hors crise, et 24 sujets sains. Les marqueurs inflammatoires MBL et CRP ont été dosés dans le sérum par ELISA, et les cytokines ont été quantifiées par Luminex dans le sérum et les surnageants de culture de PBMC de patients et des contrôles avec ou sans stimulation des monocytes par LPS et des lymphocytes par anti-CD3/CD28.Dans la deuxième partie de ce travail, une étude comparative des niveaux d’expression du gène RAC1 chez les patients FMF, en crise ou non, et les contrôles a été effectuée par PCR quantitative en temps réel. L’IL-1β et l’IL-6 ont été dosées par ELISA en présence ou en absence de l’inhibiteur de RAC1 dans les surnageants de culture de PBMC, avec ou sans stimulation par LPS. La quantification des marqueurs du stress oxydant a été effectuée dans le plasma ainsi que dans les surnageants de culture de PMN stimulés ou non par LPS, en présence ou en absence de l’inhibiteur de RAC1.Les génotypes au niveau des 3 polymorphismes à la position -511, -31 et +3954 d

In order to clarify the physiopathological and inflammatory mechanism underlying familial Mediterranean fever (FMF), we evaluated the ex vivo PBMC cytokine profile of FMF patients and compared it with that of controls. Then, we tried to study the implication of RAC1 protein in oxidative stress generation and IL-1β production in FMF patients. Finally, we aimed at investigating the possible association between IL- 1β and IL- 1ra genes and susceptibility and/ or severity of the disease.The first part of the study included 34 genetically confirmed FMF patients, of whom 9 were studied during attack and remission, and 24 healthy controls. Inflammatory markers CRP and MBL were measured in serum by ELISA and cytokine levels were evaluated by Luminex technology in serum and supernatants of PBMC cultures with and without 24h stimulation of monocytes by LPS and T lymphocytes by anti-CD3/CD28 beads.In the second part of this work, we compared expression levels of RAC1 gene between FMF patients, during or between crises, and controls by quantitative real-time PCR. Then, we measured spontaneous and LPS-induced production of IL-1β and IL-6 by ELISA in supernatants of PBMC cultured in the presence or absence of RAC1 inhibitor. Evaluation of oxidative stress markers was performed in plasma and in unstimlated and LPS-stimulated PMN culture supernatants in the presence or absence of RAC1 inhibitor.