Auteur / Autrice : | Soumeya Abed |
Direction : | Philippe Leboulch |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biothérapies et biotechnologies |
Date : | Soutenance en 2014 |
Etablissement(s) : | Paris 7 |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Les cellules souches induites à la pluripotence (iPSC) sont un modèle cellulaire prometteur pour la recherche fondamentale et appliquée. Cependant, avant d'envisager des applications cliniques, le potentiel et l'innocuité des cellules hématopoïétiques dérivées d'iPSC doivent être testés dans un modèle animal proche de l'Homme. Nous avons généré des iPSC de macaques cynomolgus (Cy-iPSC) et optimisé leur différenciation hématopoïétique, par formation d'EB et co-culture sur des cellules stromales, dans le but d'avaluer leur potentiel après transplantation autologue. Nous avons démontré l'emergence de progeniteurs hématopoïétiques CD34+/CD45+ in vitro ainsi qu'un potentiel clonogénique. Cependant, la reconstitution des compartiments hématopoïétiques à partir de cellules dérivées des Cy-iPSC dans des souris immunodéficientes reste un challenge. Dans la 2ème étude, nous avons utilisé les iPSC comme modèle d'étude de la thérapie génique de la beta-thalassémie. Nous avons généré des iPSC à partir des cellules somatiques d'un patient beta thalassémique (thal-iPSC) et les avons transduites avec un vecteur lentiviral portant le gène de globine thérapeutique. Nous avons démontré la capacité des thal-iPSC à se différencier en cellules hématopoïétiques in vitro et in vivo après transplantation dans des souris immunodéficentes ainsi qu'un switch des globines endogènes. L'intégration du vecteur lentiviral a été retrouvée dans des régions à faible et forte génotoxicité et des sites d'intégration communs entre les thal-iPSC et les cellules isogéniques et non isogéniques de patients traités par thérapie génique ont été identifiés ; suggérant une intégration non stochastique du vecteur.