Trafic intranucléaire du rétrovirus Foamy

Intranuclear trafficking of Foamy virus

• Auteur / Autrice : Joris Paris
• Direction : Ali Saïb
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biothérapies et biotechnologies
• Date : Soutenance en 2014
• Etablissement(s) : Paris 7

Mots clés

Mots clés contrôlés

Noyau de la cellule

Réplication virale

Produits du gène gag

Signaux d'export nucléaire

Spumavirus

Résumé

La protéine Gag des rétrovirus exerce plusieurs fonctions au cours du cycle réplicatif, notamment en détournant de nombreuses machineries cellulaires. Dans le cas de PFV (Prototype Foamy Virus), la protéine Gag possède un NES (Nuclear Export Signal) permettant d'exporter son ARN génomique favorisant ainsi l'assemblage des capsides virales. Nous avons identifié une séquence de loCalisation nucléolaire (NoLS) dans la partie C-terminale de la protéine Gag. Ce NoLS est composé de 2 régions, riches en arginine et en glycine qui sont nécessaires et suffisantes pour le ciblage au nucléole. L'arginine R540 est méthylée par PRMT-1 régulant ainsi les fonctions NoLS vs CBS de la protéine Gag. Pour étudier, l'étape nucléolaire du virus PFV, nous avons utilisé différentes conditions permettant de ralentir le trafic intracellulaire (hypoxie et/ou traitement à la leptomycine B) et un système de piège permettant de retenir Gag au nucléole. Dans les 2 expériences, Gag a été détectée dans le nucléole. Nous avons aussi développé une approche basée sur l'utilisation d'un ribozyme nucléolaire qui est capable de cliver spécifiquement l'ARNg de PFV au nucléole.

The structural Gag protein hijacks many cellular machineries to fulfill its distinct and fundamental roles in the replication of retroviruses. In the case of the prototype foamy virus (PFV), Gag contains a nuclear export signal (NES) which allows the gRNA-Gag complex to be exported to the cytoplasm prior to capsids assembly and virus egress. We identified a nucleolar localization sequence (NoLS) in the C-terminus of PFV Gag. This NoLS contains two regions, rich in arginine and glycine, which are necessary and sufficient for nucleolar targeting. The methylation of Arginine R540 by PRMT-1 regulates the functions NoLS vs CBS of Gag. To study the nucleolar step of PFV replication, we used different conditions that slow down intracellular trafficking (hypoxia and/or treatment with leptomycin B) and also a molecular trap system to retain Gag into the nucleolus. In both cases, Gag was detected in the nucleolus. We also developed an approach, based on a ribozyme fused to a snoRNA able to cleave specifically PFV gRNA in the nucleolus.