Congélation et maturation in vitro du tissu testiculaire prépubère de rongeurs

• Auteur / Autrice : Albanne Travers
• Direction : Nathalie Rives
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 2013
• Etablissement(s) : Rouen
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Normande de biologie intégrative, santé, environnement (Mont-Saint-Aignan, Seine-Maritime)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Institut de recherche et d'innovation biomédicale de Haute-Normandie (Rouen2012-...) - Centre d'étude et de conservation des oeufs et du sperme humains. Haute-Normandie

Mots clés

Mots clés contrôlés

Tissus (histologie) -- Cultures cellulaires

Cryoconservation

Testicule

Reproduction humaine

Résumé

Les cellules germinales souches à l‟origine de l‟élaboration des spermatozoïdes sont les cibles des thérapeutiques utilisés dans le traitement du cancer. Des stratégies de préservation des cellules germinales doivent être mises en place. Chez le jeune garçon, la congélation du tissu testiculaire et sa maturation ultérieure in vitro, évitant la réintroduction de cellules cancéreuses semblent être les stratégies les plus adaptées. Le travail présenté dans cette thèse a consisté en (i) l‟optimisation d‟un protocole de congélation du tissu testiculaire chez deux modèles animaux, la souris et le rat et (ii) l‟optimisation d‟un protocole de culture organotypique utilisant du rétinol et/ou de l‟acide rétinoïque, permettant d‟initier la spermatogenèse du tissu testiculaire décongelé de souris prépubères. L‟optimisation du protocole de congélation du tissu testiculaire prépubère de souris a montré que l‟utilisation de diméthylsulfoxyde (DMSO) à la concentration de 1,5M incubé pendant 30 minutes à 4°C et une courbe de descente en température contôlée lente sans « seeding » permet de préserver de façon optimale l‟architecture du tissu testiculaire de souris prépubère, de conserver la capacité proliférative des cellules germinales et des cellules de Sertoli et de maintenir l‟intégrité fonctionnelle du tissu testiculaire prépubère. L‟évaluation de différents protocoles de congélation du tissu testiculaire de rat prépubère, espèce présentant un déroulement de la spermatogenèse plus proche de celle de l‟homme par comparaison à la souris, confirme le protocole de congélation précédemment défini chez la souris et permet de préciser le poids du fragment à congeler (7,5mg) et le conditionnement de l‟échantillon (cryotubes), souhaitables pour une conservation optimale du tissu testiculaire prépubère. La culture organotypique de tissu testiculaire frais et décongelé de souris prépubère montre une prolifération des cellules intratubulaires, une croissance du tissu et une initiation de la spermatogenèse avec l‟utilisation de rétinol à la concentration de 10-6M similaires entre le tissu frais et le tissu préalablement congelé avec une phase de stabilisation de la température à −8°C. L‟intégrité fonctionnelle des cellules de Leydig est également correctement préservée puisqu‟une stéroïdogenèse in vitro est observée pour les deux types de culture. Ce travail a donc permis de confirmer et d‟affiner le protocole de congélation optimal pour la préservation de l‟intégrité fonctionnelle et structurale du tissu testiculaire prépubère et peut donc être proposé dans le cadre d‟une application humaine de préservation de la fertilité. Néanmoins, la maturation in vitro doit encore être optimisée pour obtenir une spermatogenèse complète. Il sera alors possible d‟envisager une utilisation sur le tissu testiculaire humain prépubère décongelé et ainsi de proposer une solution durable de préservation de la fertilité des garçons prépubères atteints d'un cancer, et d‟apporter des réponses aux questions posées par les patients sur la vie après le cancer et la prise en charge des complications et des séquelles induites par les traitements