Thèse soutenue

Remaniements rationnel de la protéine d'enveloppe virale et de ses domaines pour la détection des infections à flavivirus et l'étude d'interactions avec ses récepteurs

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Auteur / Autrice : Nora Zidane
Direction : Hugues Bédouelle
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biomolécules, biologie structurales, pathologies, biothérapies
Date : Soutenance en 2013
Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

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La protéine d'enveloppe des Flavivirus comprend 3 ectodomaines et un segment membranaire. J'ai caractérisé les propriétés de son domaine III (ED3) in vitro. J'ai mesuré la stabilité thermodynamiques d'ED3 par des expériences d'équilibres de dépliement, induits chimiquement ou thermiquement, et suivis par spectrofluorimétrie; augmenté la stabilité d'ED3 par des changements de résidus dans son coeur hydrophobe sans affecter son antigénicité; et montré qu'un domaine ED3 consensus des virus de la dengue (DENV) était hautement stable. La Protéine Ribosomale SA (RPSA) humaine comprend un domaine N-terminal replié et un domaine C-terminal désordonné. Nous avons quantifié leurs interactions avec les domaines ED3 de Flavivirus pathogènes, la laminine, l'héparine et un anticancéreux (EGCG) par des méthodes immunochimiques et spectrofluorimétriques in vitro. J'ai montré que les domaines-N ,et -C avaient à la fois des fonctions idiosyncratiques et des fonctions partagées, et que le domaine-C mimait l'héparine. J'ai déterminé la spécificité de serotype des IgMs dirigées contre le domaine ED3 d'un des 4 sérotypes de DENV en utilisant des sérums humains infectés ou non-infectes par DENV et une analyse par courbe ROC (Receiving Operator Characteristic). Ces sérums ont été testées en MAC-ELISA au moyen des 4 sérotypes d'un hybride dimérique entre ED3 et phosphatase alcaline d'E. Coli. La discrimination par ED3 entre sérums infectés par le DENV homotypique et sérums non-infectes variait avec le serotype; elle était maximale pour ED3 de DENV1 quel que soit le serotype infectant. Certains domaines ED3 discriminaient entre sérotypes de DENV. Des applications potentielles sont considérées.