Caractérisation des propriétés antigéniques d'une sérine protéase de Trichinella spiralis impliquée dans le stade invasif du parasite et application à un test sérologique

Characterization of antigenic properties of a serine protease of Trichinella spiralis involved in the invasive stage of the parasite and application to a serological test

• Auteur / Autrice : Yong Yang
• Direction : Isabelle Vallee
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Parasitologie
• Date : Soutenance en 2013
• Etablissement(s) : Paris 6

Mots clés

Mots clés contrôlés

Anticorps monoclonaux

Sérine-protéases

Trichinella spiralis

Résumé

La trichinellose est une zoonose majeure de répartition mondiale, liée aux habitudes alimentaires. Le porc demeure la principale source de transmission du parasite à l’Homme au niveau mondial. Actuellement, le seul test sérologique disponible pour le porc est un ELISA indirect basé sur l’utilisation des antigènes Excrétion/Sécrétion du stade L1 musculaire. Cet ELISA offre une sensibilité > 98 % mais ne permet pas la détection d’animaux présentant une infestation récente (< 1 mois), et induit donc l’existence d’une « fenêtre aveugle » de détection pendant laquelle l’animal présente un risque d’infection pour le consommateur. Précédemment, une protéase à sérine, NBL1, a été identifiée au stade L1 nouveau-né et a montré une antigénicité permettant le développent d’outils de détection précoce. L’objectif de cette thèse était de caractériser les propriétés antigéniques du domaine C-terminal de NBL1 (NBL1-C) afin de développer un ELISA compétitif en utilisant un anticorps monoclonal anti-NBL1-C. Cinq anticorps monoclonaux ont été obtenus et ont permis de montrer que NBL1 était spécifiquement localisé au niveau de la cuticule des embryons. De plus, une cartographie d’épitopes constituée de peptides de 15 acides aminés couvrant le domaine C-terminal de NBL1 a permis d’identifier la séquence reconnue par les anticorps monoclonaux. Il s’agit d’une séquence de 10 acides aminés répétée quatre fois dans NBL1-C. Cette cartographie d’épitopes a également permis d’identifier les épitopes reconnus par différents échantillons de serum provenant d’animaux (souris, porc, sanglier) infestés par Trichinella. Enfin, des premiers essais de développement de l’ELISA compétition ont été effectués.

Trichinellosis is a major worlwide zoonose, due to the food habits. The pork remains the main source of transmission of the parasite to human at the world level. At present, the only serological test available for detection in pigs is an indirect ELISA based on the use of Excretion / secretion antigens from muscle larvae stage. This ELISA offers a sensibility > 98 % but does not allow the detection of animals presenting a recent infestation (< 1 month), and led thus the existence of a '' blind window '' of detection during which the animal presents a risk of infection for the consumer. Previously, a serine protease, NBL1, was identified in the newborn stage and showed an antigenicity allowing development of tools for an early detection. The objective of this thesis was to characterize the antigenic properties of the NBL1 C-terminal domain (NBL1-C) to develop a competitive ELISA using a monoclonal antibody (mAb) anti-NBL1-C. Five mAbs were obtained and allowed to show that NBL1 was specifically localized at the level of the cuticle of embryos. Furthermore, an epitope mapping was established by using peptides of 15 amino acids covering the NBL1-C and allowed to identify the sequence recognized by mAbs. This sequence is about 10 amino acids repeated four times in NBL1-C. This epitopes mapping also allowed to identify epitopes recognized by various samples of serum resulting from animals (mouse, pork(pig), wild boar) infested by Trichinella. Finally, first tests for the development of the competition ELISA were made.