Etude des interactions cellulaires au cours de la myélinisation

Cellular interaction occuring during myelinisation

• Auteur / Autrice : Laura Dumas
• Direction : Alain Chédotal
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Neurosciences
• Date : Soutenance en 2013
• Etablissement(s) : Paris 6

Mots clés

Mots clés contrôlés

Tamoxifène

Cellules -- Interaction

Myélinisation

Résumé

Les mécanismes cellulaires régulant la myélinisation sont encore largement inconnus car aucune technique n’a permis jusqu’ici de repérer des oligodendrocytes adjacents avec des marqueurs distincts. Afin de s’affranchir de ce problème, nous avons utilisé une nouvelle technique d’imagerie, le Brainbow, qui permet de visualiser simultanément plusieurs cellules in vivo avec des couleurs distinctes et donc d’étudier leurs interactions (Livet et col. , 2007). Pour cela, nous avons croisé des souris transgéniques exprimant la construction Brainbow sous le contrôle d’un promoteur ubiquitaire, la lignée CAGGSbow, avec des souris PLP::CreERT2 qui expriment une forme inductible de la recombinase dans les cellules myélinisantes. Nous décrivons ici un nouvel outil biologique adaptable à de nombreuses thématiques puisque la densité d’oligodendrocytes marquées dépend de la dose de tamoxifène délivrée aux souris PLP::CreERT2; CAGGSbow. Cette méthode d’imagerie multicolore permet de décrire toutes les phases du développement post natal à l’échelle cellulaire, des stades prémyélinisants jusqu’aux stades matures, mais aussi leurs interactions. La myélinisation du système nerveux périphérique peut également être observée grâce à cette approche. Dans le but d’observer la myélinisation en temps réel, différents modèles in vitro ont été développés. Des oligodendrocytes multicolores ont été observés dans ces modèles de myélinisation. Associés à la vidéo-microscopie, ils nous permettront d’imager en temps réel la myélinisation mais aussi la remyélinisation. Notre travail devrait donc nous permettre de mieux comprendre les mécanismes cellulaires qui contrôlent le développement de la myéline

The cellular mechanisms regulating myelination during development and in pathological condition are still largely unknown. This is due to the lack of suitable methods allowing one to visualize and follow the same oligodendrocyte during myelination. To overcome this problem, we used a new and powerful imaging technology, the Brainbow (J. Livet, Nature, 2007), in order to visualize simultaneously many individual oligodendrocytes with distinct labels and thus to study their interactions. We crossed mice expressing Brainbow ubiquitously (CAGGSbow line) with PLP::CreERT2 mice, where the PLP promoter drives inducible Cre expression in myelinating cells. We described a new tool that is adaptable to many biological questions because the density of recombined oligodendrocytes is dependent on the amount of tamoxifen delivered to PLP::CreERT2; CAGGSbow mice. This multicolor imaging method is useful to describe all stages of postnatal development at the cellular level from premyelinating to myelinating oligodendrocytes, but also their interactions. Myelination in the peripheral nervous system can be observed with this approach. In order to observe myelination in real time, we developed several in vitro models. Multicolored oligodendrocytes were observed in these models of myelination. We are setting up time-lapse microscopy to analyze dynamically the myelination process but also remyelination. In conclusion, our project should considerably improve our understanding of myelination and remyelination at the cellular level