Optimisation de l’activité de l’alpha-galactosylcéramide, ligand des lymphocytes T Natural Killer invariants
Auteur / Autrice : | Élodie Macho Fernandez |
Direction : | François Trottein, Christelle Faveeuw |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Immunologie |
Date : | Soutenance le 30/11/2012 |
Etablissement(s) : | Lille 2 |
Ecole(s) doctorale(s) : | École doctorale Biologie-Santé (Lille ; 2000-....) |
Résumé
Le développement de nouvelles stratégies d’immunothérapie représente de nos jours un enjeu majeur de santé publique. Dans ce contexte, les lymphocytes T Natural Killer invariant (iNKT) exercent de puissantes activités immuno-modulatrices. Ces cellules ont la particularité de reconnaitre par l’intermédiaire de leur récepteur T (TCR), des (glyco) lipides, présentés par la molécule CD1d exprimée par les cellules présentatrices d’antigènes (APC), notamment les cellules dendritiques (DC). Initialement découvert à partir d’une éponge marine pour ses activités anti-métastatiques, l’alpha-galactosylcéramide (a-GalCer ou KRN) induit rapidement une sécrétion massive, par les cellules iNKT, de cytokines immunomodulatrices telles l’IFN-g, conduisant à la transactivation de nombreuses cellules immunitaires, notamment les cellules Natural Killer (NK), les DC ou encore les lymphocytes Tgd. Cette propriété unique permet aux cellules iNKT de contrôler, chez la souris, le développement des réponses immunes, notamment la réponse anti-tumorale. Face à ces résultats encourageants, des essais cliniques chez l’homme ont été réalisés mais les résultats se sont avérés décevants. Actuellement, il existe deux stratégies pour cibler un antigène à une population cellulaire particulière : 1) le ciblage passif, basé sur la taille des particules ou leur composition et 2) le ciblage actif, basé sur les fortes interactions anticorps/antigène ou ligand/récepteur. Nous avons testé les deux types de ciblages et avons utilisé le même polymère pour constituer nos vecteurs : le PLGA ou poly(lactic coglycolic acid). Dans une première étude (ciblage passif), nous avons comparé l’efficacité de l’encapsulation de l’a-GalCer dans des particules de tailles différentes: des nano (NP) et microparticules (MP). L’a-GalCer vectorisé dans les NP et les MP est endocyté par les DC (voie des clathrines) et active les cellules iNKT in vitro et in vivo mais ne peuvent empêcher leur anergie. Ces résultats décevants nous ont conduits à opter pour le ciblage actif des DC. Dans un premier temps, étant donné les études controversées sur le rôle des DC dans l’anergie des cellules iNKT, nous avons revisité l’implication de ces dernières dans la primo-activation/anergie des cellules iNKT. Nous confirmons ainsi le rôle primordial de DC dans la primo-activation des cellules iNKT mais surtout, nous montrons qu’elles n’induisent pas leur anergie. Représentant une population hétérogène, nous montrons que parmi les DC, les DC CD8a+ sont de puissantes activatrices des cellules iNKT. Nos résultats nous ont ainsi menés à délivrer spécifiquement l’a-GalCer aux DC CD8a+. Pour cela, nous avons greffé sur les NP de PLGA un anticorps anti-DEC205, récepteur lectinique fortement exprimé par les DC CD8a+. In vitro et in vivo, les NP/DEC205/a-GalCer induisent une plus forte activation des cellules iNKT comparativement à l’a-GalCer libre. De même, la co-délivrance d’a-GalCer et d’ovalbumine (OVA) au sein des DC CD8a+ améliore les propriétés adjuvantes de l’a-GalCer en induisant des réponses humorale et cellulaire (lymphocytes T CD8+) spécifiques de l’OVA plus importantes comparativement à la délivrance des deux composés sous leur forme libre. Finalement, de façon intéressante, nous montrons que suite à une primo-activation par les NP/DEC205/a-GalCer, les cellules iNKT sont capables de répondre de nouveau à une seconde stimulation, traduisant l’absence d’anergie des cellules iNKT. En conclusion, nos résultats indiquent que la délivrance spécifique de l’a-GalCer aux DC CD8a+ amplifie la primo-activation des cellules iNKT tout en évitant la mise en place du phénomène d’anergie et ouvrent de nombreuses perspectives dans le cadre de thérapies anti-tumorales et anti-infectieuses.