Rôle du récepteur à l’antigène des cellules B (BCR) dans la survie des cellules du lymphome du manteau : Implication des facteurs de transcription STAT3 et EGR1

Role of B cell receptor (BCR) in cell survival of mantle cell lymphoma : involment of transcription factors STAT3 and EGR1

• Auteur / Autrice : Mohand-Akli Boukhiar
• Direction : Dominique Ledoux, Fanny Baran-Marszak
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Physique
• Date : Soutenance en 2011
• Etablissement(s) : Paris 13

Mots clés

Mots clés contrôlés

JNK Mitogen-Activated Protein Kinases

Facteur de transcription EGR-1

Facteur de transcription STAT-3

Lymphomes

Résumé

Le lymphome à cellules du manteau (MCL) est un lymphome agressif caractérisé par une prolifération; de lymphocytes B matures CD5+ issus de la zone du manteau folliculaire des ganglions. Le MCL est défini pai' la translocation chromosomique t(11 ; 14) (q13 ; q32) qui entraine une surexpression de la cycline Dl. Cependant cette translocation ne suffit pas par elle-même pour induire la lymphomagénèse et des études récentes suggèrent un rôle de la sélection antigénique et de la signalisation du récepteur B (BCR) dans l'émergence du clone malin. Sur cette base, nous avons cherché à identifier dans des cellules primaires de patients MCL, des voies de signalisation dérégulées en aval du BCR et aboutissant à l'activation de facteurs de transcription impliqués dans les processus de survie des cellules tumorales. Nous avons tout d'abord montré que le facteur de transcription STAT3 est constitutivement phosphorylé dans les cellules de MCL et que cette phosphorylation est fortement augmentée en réponse à la stimulation du BCR. Les phosphorylations constitutive et induite par la stimulation du BCR de STAT3 sont le résultat d'une boucle autocrine de sécrétion d'IL6 et/ou d'IL10 dépendante du facteur de transcription NF-kB. L'inhibition de la voie Jak/STAT3 induit l'apoptose des cellules de MCL et supprime le signal de survie cellulaire induit par la stimulation antigénique. De plus, le traitement des cellules par le bortezomib, un inhibiteur du protéasome utilisé en clinique dans le traitement du MCL, supprime la phosphorylation de STAT3 ainsi que le signal de survie cellulaire induit par le BCR. Nous avons ensuite cherché à identifier d'autres facteurs de transcription, induits plus précocement en réponse à la stimulation du BCR et qui pourraient également être impliqués dans la dérégulation de la prolifération des cellules de MCL. Nous avons montré que la stimulation du BCR entraîne une augmentation importante et rapide (dès 30' avec maximum à 1h) du facteur de transcription EGR1 suivi de celle de c-MYC. De plus, l'inhibition spécifique de la kinase JNK constitutivement activée dans les cellules de MCL, entraîne une diminution de l'expression d'EGR1 associée à une augmentation de l'apoptose et à une inhibition du signal de survie cellulaire induit par le BCR. Par ailleurs, nous avons mis en évidence une activation constitutive des kinases de la famille Src (SFK) et plus précisément de Lyn, activation renforcée en réponse à la stimulation du BCR. Sur cette base, nous avons évalué l'efficacité du dasatinib (BMS-354825), une drogue qui cible les kinases SFK. Nous avons montré que le dasatinib à de très faibles doses (100nM) inhibe in vitro la phosphorylation constitutive et induite par le BCR de Lyn et de JNK, supprime l'expression d'EGR-1 et induit l'apoptose des cellules de patients leucémiques. En conclusion, nos résultats ont permis de mettre en évidence une dérégulation de voies de signalisation (SFK, JNK) et de facteurs de transcription (STAT3, EGR1, C-MYC) qui, de manière constitutive ou induite en réponse à la stimulation antigénique, participent au processus de prolifération et des cellules de MCL. L'ensemble de ces résultats ouvre ainsi la voie vers le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques ciblées dans cette pathologie.

Mantle cell lymphoma (MCL) is an aggressive and incurable malignant lymphoma, representing approximately 5% of non Hodgkin lymphomas. Its hallmark is the translocation t(11:14)q (13;32), leading to overexpression of cyclin Dl. However this chromosomal alteration is not sufficient to induce MCL and recent studies suggest the involvement of antigenic stimulation and B-cell receptor (BCR) signaling in this pathogenesis. In this context, we aimed at identifying in primary MCL cells deregulated signaling pathways downstream of BCR and leading to activation of transcription factors and to increased MCL cell survival. We evidenced a constitutive and BCR-induced phosphorylation of the transcription factor STAT3 resulting from an autocrine IL6 and/or IL10 secretion. Inhibition of the JAK/STAT3 pathway increased spontaneous apoptosis and suppressed BCR-induced cell survival. Moreover, treatment with Bortezomib induced apoptosis and a decrease of both IL6/IL10 secretions and STAT3 phosphorylation. In addition, bortezomib inhibited B-cell receptor-triggered STAT3 phosphorylation and cell survival. To further identify early genes involved in BCR-induced survival, we looked at differential expression of genes upon BCR stimulation and found that BCR engagement also led to a quick and transient induction of EGR1 expression, following by the one of c-Myc. We next evaluated the role of EGR1 in MCL cell survival and showed that inhibition of JNK by SP600125 induced a decrease of both constitutive and BCR-induced EGR1 expression, associated with an increase of apoptosis and a suppression of BCR-induced survival. We also showed that primary MCL cells displayed a constitutive and BCR-induced activation of Src family kinases including LYN and that efficient inhibition of these kinases by dasatinib led to apoptosis through inhibition of the downstream JNK/EGR1 pathway. In conclusion, our study performed on primary MCL lymphocytes evidenced that constitutive and BCRinduced signaling provide important survival signal which can be efficiently inhibited by Bortezomib and Dasatinib. Of interest, our result indicated for the first time that Dasatinib through inhibition of SFK/LYN kinases could be used as a new therapeutic agent in MCL by overcoming pro-survival signal emanating from the BCR.